玫瑰组织培养试验设计.doc

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1、玫瑰组织培养试验设计材料与方法1实验材料以'XXX'玫瑰带腋芽茎段为实验材料2实验方法实验流程：取材一消毒灭菌〜初代培养（7〜30d）-增殖培养（15〜30d）f生根培养（25〜30d）-＞驯化（10〜12d）-＞移栽2.1取材于2014年4刀份，在晴天丄午的12:00,采集生长健壮、无病虫害且具有5〜6个腋芽的枝条。2.2消毒灭菌采集试验材料后用洗涤剂将枝条清洗干净，用自来水冲洗30min后置于超净工作台上，75%酒精浸泡Imin,无菌水冲洗3〜5遍，0」％升汞（添加吐温■20）消毒lOmim无菌水冲洗3〜5遍，在培养皿屮将材料切成约1cm长的单腋芽茎段并对其进

2、行编号，枝条由上到下依次分为第1芽、第2芽、第3芽……o（从玫瑰基部剪下芽，置于■小烧杯屮，用洗衣粉清洗后在口来水下冲洗2小时以丄。在超净台丄，用75%酒精快速浸泡20〜30秒,然后用0.1%升汞溶液浸泡5分钟，无菌水浸洗4次,每次约1〜2分钊供接种备用。）（选取无病虫害、生长健壮、带腋芽的枝条，用流水冲洗涮净，在超净工作台也切成带一个腋芽长1cm左右的茎段，用70%酒精浸泡5~10s,0・1%的HgC12灭菌8〜12min,最后用无菌蒸憾水冲洗5遍。）2.3初代培养MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA30.4mg/L（1/3MS+6-BA1.

3、Omg/L+IBA0.02mg/L）将预处理好的‘XXX’玫瑰的单腋芽茎段接种于初代培养基上。培养温度为（24±1）°C,光照强度3000lx,光照12h/do2.4增殖培养MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.8mg/L(MS+BA2.5mg/L+NAA0.05mg/L)(MS+6-BA2.Omg/L+NAAO.15nig/L+蔗糖40mg/L+琼脂6g/L)将初代培养30d的，XXX，玫瑰组培苗，切为约lcm长的茎段，分别接种于增殖培养基上。培养温度为(24±1)°C,光照强度3(X)()lx,光照I2h/do2.5生根培养1/2MS

4、+NAA0.2mg/L+IBAO.5mg/L+AC1.5g/L(MS+IAA1.5mg/L+KTO.3mg/L)(1/2MS+NAA0.5mg/L)将增殖培养15〜30d的‘XXX’玫瑰约1cm长的组培苗顶梢接种于生根培养基上。培养温度为(24±1)°C,光照强度3(X)0lx,光照I2h/do(采用MS基本培养基，附加不同激素纽.合，蔗糖3%(生根培养基屮为2%),琼脂0.65%,pH值为5.8〜6.2。培养温度为23〜25°C,光照强度为1500〜2000Lx,光照时间12小吋/天。)2.6驯化将小苗移出培养室，在移栽温室屮，不打开瓶盖放置7d,然后将瓶盖拧松

5、放置3〜5d。以珍珠岩：蛭石：草炭=1：2：I(或田园土：沙子=1：1)为移栽基质，并用0」％高猛酸钾为移栽基质进行灭菌处理。将小苗取出，除去根部多余的培养基，移入预处理好的基质屮，用報料膜盖覆，并适当遮阴，控制温度在20〜28°C,和对空气湿度在70%〜90%之间。20d后逐渐揭去薄膜直至完全揭掉，可移栽到营养钵或大ffl'Po