上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成-论文.pdf

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1、918细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(7·论著·文章编号：1007—8738(2015)07—0918—05上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成刘理静，钱红(湖南医药学院临床医学系，湖南怀化418000)[摘要]目的探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用。方法将30只C57BL／6小鼠随机分为对照组(n：5)和模型组(／7,=25)。经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型，分别于第3、7、l4、28、56天随机处死5只小鼠，而对照组于第56天全部处死作为总体对照

2、，采用荧光实时定量PCR测定肺组织中miR-21表达。另外，NIH3T3肺成纤维细胞分别予Lipofectamine2000转染试剂(空白对照组)以及miR-21阴性对照物、模拟物、抑制物处理，通过MTY法检测细胞增殖能力，应用荧光实时定量PCR和Westernblot法分别检测ot平滑肌肌动蛋白(ot—SMA)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶1(ADAMTS一1)、1型胶原蛋白(Co11)、3型胶原蛋白(CoD)mRNA与蛋白表达情况。结果模型组第7～56天，肺组织中miR-21表达水平明显高于对照组，第28天达到高峰。在共同培养24、48、72、96h后，miR-

3、21模拟物组细胞活力较空白对照组增加，而miR-21抑制物组细胞活力较空白对照组降低。与空白对照组比较，miR-21模拟物组ot—SMA、Col1、CoBmRNA与蛋白表达水平升高，ADAMTS1mRNA与蛋白表达水平减少；然而miR-21抑制物组0【一SMA、Coll、CoBmRNA与蛋白表达水平下降，ADAMTS-1mRNA与蛋白表达水平上升。阴性对照组上述指标与空白对照组比较，无显著性差异。结论miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中表达上调，miR-21高表达可促进肺成纤维细胞增殖、转分化以及胶原蛋白的合成。[关键词]miR-21；肺纤维化；0【平滑肌肌动蛋白；ADAMTS一1；l

4、型胶原蛋白；3型胶原蛋白【中图分类号]R392-33，R563，Q253[文献标志码]AUp·regulationofmiR-21promotescellproliferationandcollagensynthesisinpulmonaryfibroblastsLIULying，QIANHongDepartmentofClinicalMedicine，HunanUneIsityofMedicine，Huaihua418000，ChinalAbstractlobjectiveToexploretheexpressionofmiR-21inlungtissuesofmicewithpu

5、lmonaryfibrosis，anditsroleinproliferation．trans．diferentiationandcolagensynthesisofpulmonaryfibroblasts．MethodsThirtyC57BL／6micewererandomlydividedintocontrolgroup(n=5)andmodelgroup(n=25)．Miceinthelatergroupwereintratracheallyadministeredwithbleomycintoestablishpulmona~fibrosismode1．Fiveanimals

6、jnthemodeIgroupweresacrificedondays3，7，14，28and56．whileallonesofthecontrolgroupwerekiliedonday56astotalcontro1．TheexpressionofmiR-21inlungtissueswasthenmeasuredthroughfluorescencereal-timequantitativePCR．PulmonaryfibroblastsweretreatedwithLipofectamine⋯。20o0(blankcentrelgroup)aswelIasmiR-21nega

7、tivecontrol，mimicsandinhibitor。respectively．CelIproliferativeabilitywasanalyzedbvr_rassay．ThemRNAandproteinexpressionsof~smoothmuscleactin(SMA)，adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondintype1motif(ADAMTS·1)，colagentypeI(Co