超声波辅助农杆菌介导转化大豆未成熟胚的研究-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2012．40(2)：658—661责任编辑郑丹丹责任校对况玲玲超声波辅助农杆菌介导转化大豆未成熟胚的研究钱雪艳，郭东全，杨向东，薛键，邢国杰，张原宇，赵桂兰(吉林省农业科学院生物技术研究中心，吉林长春130033)摘要[目的]进一步提高栽培大豆的遗传转化效率。[方法]以吉林省大豆主栽品种吉育67、吉育89未成熟子叶为外植体，对超声辅助农杆菌介导大豆遗传转化过程中处理液浓度、超声强度和时间等参数进行了优化。【结果]在农杆蔚菌液浓度∞为0．4，超声功率ll5w处理l0s时，gus

2、基因在体细胞胚体中的瞬时表达率最高。对获得的转化再生苗PCR检弼I=袭明，外源基因已整合到大豆的基因组中，转化率约为4．35％。[结论]为进一步开展以大豆未成熟子叶为外植体的高效遗传转化覆橱关应用研究提供了参考。关键词超声波辅助农杆菌转化；未成熟胚子叶；遗传转化；大豆中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—6611(2o12)02—00658—04StudyonUtrasonic．assistedAgrobacter／um-mediatedTransformationofSoybeanImmatureCotyledonsQ

3、IANXue-yahetal(ResearchCenterofBiologicalTechnology，JilinAcademyofAgriculturalSciences，Changchun，Jilinl3oo33)AbstractfObjective1Thestudyaimedtofurtherimprovethegenetictransformationeficiencyoft}lecultivatedsoybean．iMethod}WitlItlleimmaturecotvledonsofthesoybcanleading

4、varietiesinJIjinProvinceincludingJiyu67andJiyu89astlleexplan~，theparameterssuchasthetreatingliquidcohen．．ultrasonicintensityandtimeinthegenetictransformationprocessoftheultrasonic—assistedAgrobacterium．mediatedsoy—beanweFeoptimized．[Result]Thegusgenehadtllehighesttran

5、sientexpressioninthesomaticembryoswhentheAgrobacterium—mediatedbacteriumfluidwasadjustedto0．4ODandtheultrasonicpowerwasl15Wfortreating10S．Thedetectiononthetransformedregenerationplanfletsshowedthattheexogenousgenehadbeenintegratedintothegenomeofthesoybeans．withtheconv

6、ersionrateofabout4．35％．IConclusion]Thestudyprovidedthereferenceforfurtherdevelopmentofthehigheficiencygenetictransformationanditsrelatedapplicationstudyandapplicationwiththesoybeanimmaturecotyledonsastheexplants．KeywordsUltrasonic．assistedAgrobacterium-mediatedtransfo

7、rmafion；Immaturecotyledon；Genetictransformation；Soybean高效遗传转化技术体系的建立是开展大豆基因工程改育89未成熟子叶作为外植体，对超声波辅助农杆菌介导转良及相关功能基因组学研究的一个重要前提。自1984年De化方法中农杆菌菌液浓度、超声波强度及处理时间等参数进Block等首先以农杆菌介导法获得大豆转基因植株以来⋯，行了优化，旨在进一步提高栽培大豆遗传转化效率，并为大许多研究者对影响大豆遗传转化的诸多因素如基因型、外植豆高效遗传转化及相关应用研究提供参考依据。体类型、筛选剂、激

8、素种类及浓度、培养基等进行了改进，但1材料与方法大豆遗传转化效率仍然较低。大豆也是目前公认的转化1．1材料较为困难的农作物之一。针对这一问题，Finer等发展了一1．1．1受体材料。选用的受体材料为栽培大豆品种吉育67种新的大豆遗传转化方法，该法结