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1、海军医学杂志2002年6月第23卷第2期 JournalofNavyMedicine2002Jun.Vol.23,No.2·159·综述与讲座结核杆菌实验诊断的研究进展陈双红,封 岩(海军医学研究所流行病研究室,上海 200433)[摘要]结核病是严重危害人类健康的主要疾病之一,实验室诊断是早期发现结核病、指导临床用药、评价治疗效果的重要手段。本文从细菌学诊断、免疫学诊断、分子生物学诊断和基因诊断4个方面对结核杆菌的检测方法进行了阐述。[关键词]结核杆菌;免疫;基因芯片;诊断[中图分类号]R378.911
2、[文献标识码]A[文章编号]1009-0754(2002)02-0159-0314 结核病是严重危害人类健康的传染病,曾一度物,有分枝杆菌生长繁殖时,C棕榈酸会被消耗,14得到控制。因滥用抗结核药物,以及艾滋病等特殊产生带有放射性的CO2,经仪器检测可确诊结核杆病毒的感染而加重人群易感性等原因,使耐药菌株菌复合群。该项技术极大地促进了结核病细菌学诊不断出现,目前,全球结核病的疫情出现第3次回断的发展。升。因此,及时监控结核病的流行状况,是预防和控2 免疫学检测制其传播的首要步骤。用于结核病流行病学诊断的
3、 结核病的细菌学检测存在较多技术上的缺陷。主要方法有:生物分型、质粒分型、酶谱分型、血清分1976年NASSAU应用ELISA方法检测血清中结型等;检测方法有:细菌学检测、免疫学检测、质谱分核杆菌的抗体取得成功,从此开始了结核病的免疫析、PCR诊断、DNA指纹技术和基因芯片检测技术。学检测。早期是用PPD(结核菌素纯蛋白衍生物)这些方法各有优劣,还需不断发展和完善。作为结核杆菌抗体的检测抗原,PPD的抗原性较1 细菌学检测弱,特异性差,限制了该技术在临床诊断中的应用。 对结核病人痰的细菌学检测是结核病
4、诊断、治结核菌重组蛋白、LAM(脂阿拉伯甘露聚糖)、LPS疗及评价治疗效果最可靠的标准。常规的细菌学检(脂多糖)等是近年来国外研究成功的较为优化的抗测方法有痰涂片法、培养法、药敏试验及根据其理化原,应用后极大提高ELISA检出率。结核杆菌的特性而建立的菌型鉴定法。涂片法是最基本的检测IgG抗体的血清水平与病变程度呈正相关,因此检方法,具有简便、快速的特点,但敏感性差,平均检出测血清中IgG抗体的水平对于活动性疾病的诊断[1]率只有25%～35%,无法区分死菌、活菌。培养有重要意义。结核抗原的检测是结核病免
5、疫诊断的法周期太长,约4～8周,同时必须结合药敏试验和另一条途径,以抗结核杆菌的单克隆抗体包被酶标菌种鉴定试验才能进一步确诊,这样所需周期更长,板,应用双抗体夹心ELISA检测,特异性可达不利于临床上结核病的诊断和治疗,加之试验过程97%,阳性率为75%～80%,与PCR检测率相似。中的影响因素很多,不易标准化,不能满足临床亲和素2生物素ELISA法,则无需抗结核杆菌的单需要。克隆抗体,检测率有所提高,易于推广。乳胶凝集试据研究,结核杆菌的繁殖受STPK(Ser/tHR蛋验则是以乳胶作为载体,连接结核杆菌
6、的抗体和待白激酶包括PknA、PKnB、PKnd)的控制,经常处于检抗原,通过直接观察乳胶的凝集状态判断检测结[2]休眠状态和稳定期,因而生长缓慢。针对结核杆果,更具直观性。用结核菌重组蛋白、脂阿拉伯甘露菌生长缓慢这一特性,近年来国外研制出结核杆菌聚糖、脂多糖作为抗原,用胶体金进行标记而建立的的快速培养和药敏系统———BactecTB2460系统。金标免疫层析或金标免疫渗滤,无需特殊操作,只需该系统是根据分枝杆菌生长时需要特殊C源的特3～5min出结果,是更为简便、快速的检测方法。14性,在培养体系内加入
7、放射性同位素C棕榈酸底ESAT26(早期分泌性抗原性靶)是从结核杆菌·160·海军医学杂志2002年6月第23卷第2期 JournalofNavyMedicine2002Jun.Vol.23,No.2短期培养滤液中纯化分离的一种低分子量分泌性蛋型或不同型的结核杆菌经不同的酶切获得的谱型不白,具有较强的免疫原性。据PLLOCK等报道,同,通常可分为7类(A1、A2、A3、A/Ⅰ、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅰ)ESAT26仅在少数几种致病性分枝杆菌中分泌,主或9类(A、B、C、D、E、F、G、H、I),不同的菌株谱型要是结
8、核杆菌,90%以上非致病性分枝杆菌中缺乏,还有地区特异性,因此通过对谱型的分析可进一步甚至在BCG菌株中都缺乏该种蛋白。而传统的结确定结核杆菌的传播来源。双重复序列插入PCR核菌素纯蛋白衍生物(PPD)包含的抗原范围广泛,法是临床应用较多的分子生物学检测方法,其原理有致病性分枝杆菌、环境分枝杆菌、GCG疫苗菌株。是利用TB基因组中广泛存在的IS6110和GC富含因此,与PPD相比,ESAT26作为结核杆菌诊断抗原区的拷贝数和分
