资源描述：
《RAPD技术及其应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、,.,。《生物工程进展》1992V0112N。‘扣‘汾.叮专论;丫RAPD技术及其应用惠东威陈受宜(中国科学院遗传所植物生物技术开放实验室)DNA分子水平上的一态性检侧技术是进增产物通过聚丙烯酞胺或琼脂糖凝胶电泳分多__,。rzerB染色或放射性自显影来检测扩行基因组研究的基础自从1975年Codick离经E增产等人第一次利用RFLP(卫estrieti。二_Fr找gme-物DNA片段的多态性,这些扩增产物DNA片ntLengthPolymorphlsm限制片段长度多态段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多。,态性性)进行腺病毒血清型突变体基因组作图以来.RAPD所用的一系列引物DNA序
2、列人们便开始广泛利用DN八分子水平上的多态各不、,,性进行基因组遗传图谱构建基因定位以及生相同但对于任一特定的引物它同基因组。D。物进化和分类的研究同时也发展了越来越多NA序列有其特定的结合位点这些特定的,的检测DNA分子水平多态性的技术例如利用结合位点在基因组某些区域内的分布如符合VNariae认e了anemept,TR(VblNmbTdR邸数PCR扩增反应的条件即引物在模板的两条链、ou-,产目可变的串重复序列)CAS(CpledAmpli上有互补位置且引物3端相距在一定的长、ficationandSequeneing联增测序),。合扩度范围之内就可扩增出DNA片段因此如、SateNA
3、liteDN八等进行D分子水平多态性果基因组在这些区域发生DNA片段插入缺。检测方法失或碱基突变就可能导致这些特定结合位点分,、1990年Will反a爪s等人(i)第一次运用随布发生相应的变化而使PCR产物增加缺少。机引物扩增寻找多态性DNA片段作为分子标或发生分子量的改变通过对PCR产物的检测。-。记并将此方法命名为RAPD(RandomAm即可测出基因组DNA在这些区域的多态性eoore,plifidplymphiDNA随机扩增的多态由于进行RAPD分析时可用引物数很大虽然DNA)尽管RAPD技术诞生的时间很短,性但对每一个引物而言其检测基因DNA多态性的DNA多态区域是有限的,由于其
4、独到的检测性的方式以及快但是利用一系列引物则可以使、。。速简便的特点使这些技术已渗透于基因组检测区域几乎覆盖整个基因组因此RAPD可。研究的各个方面以对整个基因组。DNA进行多态性检测这就。是RAPD检测多态性DNA的原理RApO技米及原理RAPD在基因定位及为RFLp连锁间隔区导,RAPD技术建立于PCR技术基础上它是找新标记上的应用利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核昔酸单链(通常为十聚体)为引RAPD可以利用一系列引物对整个基因组,。NA多态性分析,,RAPD能在物对所研究基因组ONA进行PCR扩增扩进行D一般来说一1一一次反应中检,F:,3Z测基因组的多个位点因此
5、它可交后代则可进一步从F判断出F个体就DNA样品间多态性差异,快速寻找两组进而所研究的目标基因而言是否纯合及其等位基因。得到与此差异区域相连锁的DNA标记这样是否纯合(如抗病性基因可分为纯抗和纯敏,F:,利用RAPD即可定位在某一特定DNA区域内感)这样将分成两组分别随机取10一20,,,特定基因(目标基因)也可为RFLP连锁图株分别提取DNA并等量混和在一起这样就。DNA库。NA上某一区域增加新的DNA标记构成了两个由于这两个D库对在,目标基因,利用RAPD进行基因定位根据样品来而言是经选择的而其余部分则是随:,源可用如下两种方法机选择的因此这两个DNA库在目标基因所在、。一DNA区域完
6、全不同,近等位基因系的基因定位而其余区域则近似相同近等位基因系是由提供目标基因的供体亲这样通过RAPD即可找出同目标区域相连锁的,,,。本同轮回亲本杂交并多次回交经每代对目标DNA多态性标记进而定位此基因,:F3,基因选择而获得的除目标基因外其余性状大如果没有F个体自交后代也可用上述。,,部分都同轮回亲本相同的品系因此其基因方法构成两个百NA库但由子显性基因的一一DNA库中混有隐性基因,因此只有组DNA除目标基因所在区域同轮回亲本不同同显性基。。外;其余部分则基本相同这样就可利用RAPD因相同连锁的DNA标记能被寻找到‘一“s对这两个基因组一轮回亲本和近等位基因系Kseil用葛首对Dms/
7、8(棉疫病)抗,FZ,Z一DNA进行多态性检测找出两个基因组扩增性基因有分离的群体为材料将F群体中,以这些,RFLP产物的差异差异产物为标记经经Fs鉴定分成对棉疫病抗性纯合子和敏感纯合。,DNA库,分析即可定位此基因子两组分别构成两个用30个引物对Tanksley(5)DNA库进行RAPD检测,利用番茄近等位基因系这两个找出三个多、RioGrandePto10GrandeR1400OHD4800和OPH15一同其轮回亲本
