黄金冠桃及其品系RAPD分析

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1、黄金冠桃及其品系RAPD分析王光全孟庆杰冯海霞张建垒(聊城大学生命科学学院，山东聊城252059)摘要：为探讨黄金冠桃及其品系的亲缘关系，本文对7个不同品系的桃材料利用RAPD技术进行了基因组DNA多态性分析。从80个引物中筛选出15个10bp的随机引物对黄金冠桃及其品系的DNA样品进行PCR扩增，共得至1J77条谱带，34条表现多态性，多态性比率达44．2％，其中包含3条特异性谱带，揭示了桃植物丰富的遗传多样性。且利用NPSYS软件和UPGMA法对扩增结果进行了品系间相似系数的计算及聚类分析。结果表明相似系数在0．

2、78-0．88之间，黄金冠与锦绣2号的亲缘关系最近，与黄／

3、!1919亲缘关系最远。关键词：黄桃：品系；亲缘关系：RAPD黄金冠桃是于20世纪90年代从锦绣黄桃杂交实生种中选出罐藏、鲜食兼用黄桃优系，经多年在山东、江苏的多点区域试验和生产试栽，性状稳定，综合表现优良，2006年9月通过山东省科技厅组织的专家鉴定，2007年通过山东省林木良种审定委员会审定，2008年获得山东省科技进步三等奖。黄金冠7月底8月初成熟，酸甜适口，含糖量高，是一个综合性状优良的加工品种，具有广阔的发展前景。“黄金冠”桃果实中大，整齐匀称，果

4、皮色泽鲜黄靓丽，果皮至果核无任何红色素，果肉含可溶性吲形物17．3％，酸甜可口，香味浓郁，口感品质优，解剖加工利用率83．1％，成品罐头块形整齐，果块大，边缘光滑，金黄一致，有光泽，核窝小，肉肥厚，肉质细腻，软硬适度，甜酸适口，香味浓厚，加工性能优异，有很好的加工适用性⋯，经多点试验，“黄金冠”桃表现早熟丰产，第2年开花结果，第3年每666．7m2产量为1655kg，第4年每666．7m2产量3014kg，第五年每666．7m2产量可达万斤，并具有较强的适应性和抗逆性等优点【I】。在山东的临沂、日照及江苏的赣榆县等地

5、进行了示范推广后，经济效益显著，发展前景广阔。黄金冠桃具有如此多的优良性状和经济价值，因此备受人们的青睐，从分子水平研究其亲缘关系、分析进化过程，确定其亲缘关系12训。在桃的应用研究上，基金项目：教育厅高校科研基金(J07YFl7)，聊城人学重点科研基金(X061006)资助项目。许多学者做了大量富有成效的工作，如利用RAPD技术构建分子图谱酗】、Warburton[71等和Badenes[81等分别对美国和西班牙的桃品种进行遗传多样性分析等等，本实验结合以上研究，选取了7个黄桃品种进行了RAPD．PCR分析[9-1

6、6】，并构建了遗传树状图对桃不同品种间的亲缘关系进行了研究，旨在丰富该组植物系统学研究内容，为我国桃种质资源的分子生物学方面的研究提供依据。1材料与方法1．1供试材料及仪器供试的黄桃品种总共有7种，分别为锦黄2号，锦黄3号，锦黄4号，黄桃19号，黄金冠，锦绣，早风王，供试的黄桃嫩叶子2009年4月初采自聊城大学生命科学学院黄金冠桃实验基地。嫩叶采摘后立即放入冰壶中保存，带回实验室，置于-80℃冰箱中保存，备用。218供试仪器有BCD．239V型冷藏冷冻箱(河南新飞电器有限公司)：高速冷冻离心机(北京思达兴业仪器有限公

7、司)；UV-2100型紫外可见分光光度计(上海龙尼柯仪器有限公司)；紫外凝胶成像系统(美国，AlphaInnotech)；SHB．III型真空干燥泵(郑州长城科工贸有限公司)；T-214型电子天平(北京塞多利斯仪器系统有限公司)；HH．2型恒温水浴锅(金坛市新航仪器厂)；平板电泳槽及电泳仪(北京六一仪器厂)；PCR扩增仪(德国eppendorf)；中型微波炉(广东格兰仕集团有限公司)等。1．2试验方法1．2．1黄桃DNA的提取从．80℃冰箱中取出保存的黄桃嫩叶，在电子天平上称取2g，置于．70"C研体内，并在研体内加

8、入适量液氮，快速研磨成粉末(随时加入液氮，以防粉末融化)；后将研磨好的粉末转移到50mL的离心管中进行提取、纯化；向50mL的离心管中加入冰冷的提取介质CTAB．free，上下颠倒混匀，O℃放置10min；在4℃，5000r／rain离心10min，弃上清液，如果上清液粘稠，继续使用CTAB．free清洗；加入15mL，65℃预热的CTAB提取缓冲液，置65℃的恒温水浴锅中水浴，30min，并不时混匀；室温冷却，加入等体积的(氯仿)：(异戊醇)=24：1的氯仿异戊醇，温和混匀20min后，在4℃，7000r／min离

9、，th,10rain，取上清液；重复抽提，至中间无白色沉淀；取上清液，加入1／2体积的NaCl(5mol／L)，混和均匀，加入O．6倍体积的冷冻异丙醇(．20℃)，室温放置1h后，在4℃，12000r／min离心5min；弃上清液，清洗，干燥沉淀后，溶于适量高盐TE；加入2倍体积的无水乙醇(．20℃)沉淀DNA，在4℃，12000r／min，离