RAPD技术在家蚕遗传育种上的应用.pdf

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1、第47卷第4期广东蚕业Vo1．47。No．42013年12月GUANGD0NGCANYEDec．20l3DOI：10．3969／j．issn．2095-1205．2013．04．05RAPD技术在家蚕遗传育种上的应用吴凡陈登松李德臣赵春晓(1湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉430070；2安康市蚕桑研究所，陕西安康725019)摘要：介绍了RAPD技术，概括了RAPD技术在家蚕遗传育种中的应用情况，分析了RAPD技术在家蚕遗传育种上的应用前景。关键词：RAPD；家蚕；遗传育种；应用中图分类号：$882文献标志码：A文章编号：2095—1205(2013)04—20—03家蚕遗传标记的发

2、展经历了漫长的历史过程，[为首的两个研究小组几乎同时建立的检测随机扩至今已出现了形态标记、生化标记、细胞学标记、增DNA的分子技术。它是建立在PCR技术基础上分子标记4类具有代表

3、I生的遗传标记。目前，所的一种遗传标记技术，以所研究的总基因组DNA采用的分子标记主要有限制性片段长度多态性为模板，用人工合成的随机的短脱氧核苷酸片段(RestrictionFragmentLengthPolymorphism，简称(一般9—10bp)作为引物进行PCR扩增，经琼脂RFLP)、扩增片段长度多态性(AmplifiedFragment糖凝胶电泳和染色来确定DNA中的核苷酸顺序，LengthPolymo

4、rphism，简称AFLP)、随机扩增多态检测DNA序列的多态性。该技术具有快速、简性DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA，简便，多态性检出率高、可自动分析的特点，可用称RAPD)、微卫星DNA(SimpleSequenceRe—于所有生物体，不需要探针和测序就能直接对基peat，简称SSR)、简单序列重复区间扩增多态性因组进行检测，但不能提供完整的遗传信息，而(InterSimpleSequenceRepeats，简称ISSR)、单核且其扩增产物的稳定性差，不需用同位素跟踪，苷酸多态性(singleNucleotidePolymorphism，简称操作安全，

5、简单易行，对实验设备的要求低且周SNP)等。其中RAPD技术问世以来，以其检测期短，一般对人不构成危害。所需DNA样品少，快速、简便的特点迅速引起动物遗传育种学家的但对纯度要求很高。关注，应用于基因组研究的各个领域，目前，RAPD技术是在家蚕中进行标记和定位运用最多的2RAPD技术在家蚕遗传育种中的应用一种方法。本文对RAPD技术及其在家蚕遗传育2．1家蚕DNA指纹分析及品种鉴别种中的应用作简要概述。保持家蚕品种的真实性对家蚕品种的选育尤1RAPD技术及其特点为重要，进行纯度鉴定可以发挥家蚕品种优良的遗传特性，确保蚕茧生产稳产、高产，也是蚕种随机扩增多态性DNA(RandomAmplifi

6、ed质量检验检疫的重要项目。PolymorphicDNA，简称RAPD)是1990年美国杜童晓等利用RAPD技术对进展中的已经连邦公司科学家Willan~和加里福尼亚研究所Welsh作者简介：吴凡(1980一)，女，山东汶上，硕士研究生，助理研究员。Tel：027—87380765，E—mail：wufan996@163．corn通讯作者：陈登松(1968一)，男，研究员。Tel：027—87380765，E—mail：hbcds816@126．con第4期RAPD技术在家蚕遗传育种上的应用21续lO代全同胞兄妹交配的代表品系IS—cl08A个种的DNA多态性，进一步证实了家蚕起源于中国体

7、基因组DNA进行扩增，分析其遗传纯度，结果野桑蚕。聂磊l1采用RAPD标记技术分析山东省表明家蚕近交系IS—cl08A10同蛾区不同个体之间区保存的58个家蚕品种资源的DNA多态性。拥有相同条带的比率较高，多态性带频率低，平RAPD标记在家蚕品种间表现出丰富的多态性，并均为1．830％，明显低于亲本c108个体间的多态性根据58个家蚕品种的指纹图谱，构建了供试家蚕带频率(7．207％)，同时也低于实用品种871的多品种资源的分子系统发育树，为家蚕新品种选育态性带频率(7．08％)。唐斌等7_利用筛选出的提供基础信息。RAPD随机引物$77稳定扩增出苏菊、明虎的2．3基因定位DNA特异性片段

8、RS和RM，克隆和测序后大小分随着分子生物学的快速发展，使家蚕基因组别为l694bp和1303bp，能够准确，快速地鉴学的研究不断深入、遗传图谱的不断构建和完善，别所标记的苏菊、明虎及其Fl蚕品种。唐斌等为一些控制家蚕重要性状基因定位的研究提供了利用筛选出的RAPD随机引物$42，稳定扩增出家便利。蚕品种苏5、苏6亲本品种的DNA特异性片段R5汪琳等[13]以家蚕龙角(K)近等基因系第11和R6，克隆和测序确认其大小分别