几种不同样本的dna提取方法

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1、样品类型、采集要求与处理样品类型数量要求检测用途存放条件备注新鲜肿瘤提DNA不少于1克≤-20℃a.低温运输。病变组织用肿瘤组织提DNAa.如是整块蜡块，余下2/3封蜡后检测完不少于1/3块室温病例蜡块用毕后寄回。a.可以是已经切好并已放在载玻片上的切片。a.5微米切片不少于6b.用切片机切片后，可直接用干净的镊子肿瘤组织片提DNA将组织切片转移至干净的离心管、病例石蜡切室温b.10微米切片不少于4用或其它可密封的容器中。片片(表面积>0.8mm2)c.如果肿瘤组织切片的面积较小，请适当增加切片的数量。所有切片均为未

2、经染色的白片。a.不得使用肝素抗凝提DNA全血体积不少于3ml2~8℃b.采集后时间不超过1周用c.低温运输a.不得使用肝素抗凝b.全血采集完4小时内进行血浆分离c.血浆分离操作：1.将全血用800转/分钟，离心10分钟2.取上清，将上清移到另一个新的离心管提DNA血浆体积不少于1ml≤-20℃中用3.将此上清液8000转/分钟，离心10分钟4.取上清，并将上清移到另一个新的离心管中，此上清即血浆。d.低温运输或直接使用商业化试剂盒提取DNA。a.全血采集完2小时后，5小时内进行血清分离b.血清分离操作：1.将全血用

3、800转/分钟，离心10分钟提DNA2.取上清，将上清移到另一个新的离心管血清体积不少于1ml≤-20℃用中3.将此上清液8000转/分钟，离心10分钟4.取上清，并将上清移到另一个新的离心管中，此上清即血清。c.低温运输提DNAa.采集时间不超过1周胸腔积液体积不少于5ml≤-20℃用b.低温运输新鲜活检样提DNA不少于0.2克≤-20℃a.低温运输品用新鲜肿瘤不少于1克提RNA≤-80℃a.直接≤-80℃储存，或加入2mlTrizol，剪碎后≤-20℃储存病变组织用b.低温运输a.室温运输肿瘤组织提RNA不少于1

4、/3块室温b.如能在病理样品制备时所有福尔马林病例蜡块用能加入RNA酶抑制剂更佳。a.5微米切片不少于6肿瘤组织a.室温运输片提RNA病例石蜡切室温b.如能在病理样品制备时所有福尔马林b.10微米切片不少于4用片能加入RNA酶抑制剂更佳。片(表面积>0.8mm2)提RNAa.不得使用肝素抗凝全血体积不少于3ml≤-20℃用b.加入2倍Trizol后≤-20℃储存a.直接≤-80℃储存，或加入2mlTrizol，剪新鲜活检样提RNA不少于0.2克≤-80℃碎后≤-20℃储存品用b.低温运输2样品DNA/RNA提取2.1

5、QIAGEN血液提取DNA试剂盒操作步骤1．加20µLProteaseK到1.5ml离心管中。2．加200µL的样品液（50~100µL抗凝血，补充PBS到220µL）。3．加200µL的BufferAL，涡旋15s。4．56℃温育10min，直到裂解完全。5．快速离心。6．加200µL乙醇（100%），涡旋15s，快速离心。7．转移混合液到Spincolumn（2ml收集管），6000g或8000rpm，离1min，换新管，弃掉旧的收集管。8．加500µLBufferAW1，涡旋15s，6000g或8000rpm，

6、离1min，弃旧管换新管。9．加500µLBufferAW2，涡旋15s，全速（20，000g或14，000rpm）离1min10．换新管，全速（20，000g或14，000rpm）空管离心3min。11．新离心管，100µLBufferAE温室温育5min，6000g或8000rpm，离1min，重复洗脱3次。2.2QIAGEN石蜡样品DNA提取试剂盒操作步骤1.用解剖刀修剪去除样品的石蜡2.样品切成5-10µm（样品表面不要接触空气）3.立即将组织块放入1.5ml离心管中，加入1ml二甲苯，盖紧并混匀10s4.室

7、温下最大离心速度离2min5.小心的吸去上清，切勿吸去颗粒（沉淀）6.加入1ml无水乙醇到沉淀中，震荡混匀（去除二甲苯）7.室温（15-25℃）最大离心速度离2min8.吸去上清，切勿吸去沉淀9.打开离心管盖子，室温或37℃晾干，约10min，直到乙醇完全蒸干10.沉淀中加180µlBufferATL，再加入20µl蛋白酶K，震荡混匀11.56℃消化1h，直到样品完全裂解12.90℃孵化1h（在BufferATL中90℃孵化可逆转部分甲醛修饰的核酸）（如果只有一个加热器，放在室温等温度升到90℃是再放上去）13.快速

8、离心收集管壁上的液体（等温度降到室温，如必需可加入2µlRNA（100mg/ml）酶室温孵育2min去除RNA）14.加入200mlBufferAL混匀再加入200µl无水乙醇充分混匀，可能会产生白色絮状沉淀（如果样品比较多可以将BufferAL和乙醇预先加在一起再加入以节省时间）15.快速离心收集管壁上的液体16.将上清小心转移到QIA2ml