树突状细胞融合瘤苗对大鼠骨肉瘤的主动免疫治疗.doc

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1、树突状细胞融合瘤苗对大鼠骨肉瘤的主动免疫治疗作者：于哲，范清宇，郝新保，龙华，刘云燕，文艳华，赵宏【关键词】骨肉瘤【Abstract】ATM:Toevaluatethetherapeuticeffectivenessoftumorvaccinefromfusionofdendriticcells(DCs)withtheosteosarcomacellsinosteosarcoma.METH0DS:TheUMR106cel11inewasinjectedsubcutaneouslyintotheSDratthighlaterallytoestahlishtheanimalnio

2、de1.DCsobtainedfromSDratbonemarrowweTepropagatedinvitroimdeftheconditionofrGMCSF,rIL4andnrhTNFa.DCswerepurifiedbymonoclonalantibodyOX62andmagneticbeads・ThentheUMR106cel11inewasfusedwithDCstoobtainthetumorvaccineandthetherapeuticeffectivenessofthetumorvaccinetotheoriginaltumorandlungmetastas

3、isintheanimalmodelwasobserved.RESULTS:Sixweeksafterthetreatmentwithtumorvaccine,theweightoftheoriginaltumorandtherateoflungmetastasisinthetherapeuticgroupwereboth1argelyreducedcomparedwiththoseincontrolgroups(P<0.01).CONCLUSION:Thefusiontumorvaccineperhapscanbeusedintheclinicaltreatmento

4、fosteosarcoma・[Keywords]dendriticcelIs；osteosarcoma；immunotherapy【摘要】目的:探讨大鼠树突状细胞(dendriticcells,DCs)融合瘤苗在骨肉瘤免疫治疗中的应用•方法:用大鼠骨肉瘤细胞系UMR106建立大鼠骨肉瘤动物模型，应用重组大鼠rGMCSF,rIL4和nrhTNFa培养大鼠骨髓前体细胞获得大量DCs,经标抗大鼠0X62mAb免疫磁珠分离纯化后的DCs经形态学观察、表型检测、功能学实验鉴定，然后将细胞系UMR106与大鼠树突状细胞融合作为瘤苗应用于荷瘤大鼠，观察其抑制肿瘤生长和肺转移的效果•结果:在

5、治疗6wk时治疗组和对照组相比，瘤重明显减小(P<0.01)；肺转移发生率降低(P<0.01)•结论:大鼠骨肉瘤细胞系UMR106与树突状细胞的融合瘤苗可望在骨肉瘤的治疗中发挥作用.【关键词】树突状细胞；骨肉瘤；免疫治疗0引言骨肉瘤是常见的恶性程度极高的骨源性肿瘤，患者往往在术前就已经有了微小肺转移灶,加之局部复发，预后很差.由于放疗的不敏感、化疗的抗药性等局限，临床上愈加关注对骨肉瘤开展免疫治疗的研究,制备肿瘤疫苗为其主耍手段之一•树突状细胞(dendriticcells,DCs)是冃前为止发现的功能最强的专职抗原提呈细胞(antigenpresentingce

6、ll,APC),由于其形状似树突而得名.它对诱导初次免疫应答具有独特的功能，能摄取和加工提呈抗原，表达高水平的MHC分子、共刺激分子、黏附分子并分泌高水平TH1型细胞因子TL12,启动T细胞介导的免疫反应.目前关于DCs在肿瘤免疫治疗中的应用，已经成为肿瘤免疫治疗的热点之一•我们应用大鼠骨髓來源的DCs与大鼠骨肉瘤细胞系UMR106融合，制备肿瘤疫苗，观察其治疗效果，探讨其临床应用的可能性.1材料和方法1.1材料仪器和主要试剂:MiniMACS磁性分离仪（徳国MiltenyiBiotecGmbH公司）；流式细胞仪（美国BDPharMingen公司）；细胞融合仪（BTX公司的2

7、001型）；大鼠骨肉瘤细胞系UMR106（美国AmericanTissueCultureCollection）；6〜8wk龄SD大鼠（第四军医大学实验动物中心提供）；小牛血清和RPMT1640培养基（美国HyClone公司）；淋巴细胞分离液（上海华精牛:物高科技有限公司）；rGMCSF,rTL4（R&D公司）；新型重组人肿瘤坏死因子nrhTNFa（第四军医大学生物技术中心）；FITC标记抗大鼠MHCI和MHCII,FITC标记抗大鼠0X62,PE标记抗大鼠CD80,PE标记抗大鼠CD86（英国Serot