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《肝癌细胞hepg2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、肝癌细胞HepG2与肝癌患者树突状细胞融合瘤苗的体外效应论文张红梅，张利旺，刘文超，潘伯荣，斯晓明，任军【关键词】细胞融合EffectofavaccinepreparedbyfusionofHepG2cellspatientsainvitro【Abstract】AIM:Toinvestigatethefusionabilityofhepatocellularcarcinoma(HCC)patientderiveddendriticcells(DCs)phocytestoelicitspecificimmunityagainstHCCi
2、nvitro.METHODS:Peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)fromHCCpatientsangranulocyte/macrophageclonestimulatingfactor(rhGMCSF)andinterleukin4(rhIL4),PBMCsoleculesetry.ThefusioncellsofDCsulatetheproliferationofautologousTlymphocytesphocytes(CTLs)olecules,includingCD8390.4%,
3、CD8087.7%,CD8684.4%andHLADR98.5%.ThefusioncellshadaremarkablygreaterabilitytostimulatetheproliferationofautologousTlymphocytesinparisonHCCpatientsulateautologousTlymphocytestoelicitspecificantitumorimmunityagainstHCCandmayserveasapromisingvaccineforimmunotherapyofHCC.【K
4、eya,hepatocellular;immunotherapy【摘要】目的：将肝细胞癌（HCC）患者树突状细胞(DCs)与肝癌细胞HepG2融合制备瘤苗，检测其体外诱导同源T细胞产生特异性抗HepG2的免疫效应.方法：以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血单个核细胞（PBMCs），应用重组人粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(rhGMCSF)、白细胞介素4(rhlL4)体外诱导培养DCs；聚乙二醇融合DCs与肝癌细胞HepG2,MTT法测定融合细胞(DCs/HepG2)刺激同源T淋巴细胞增殖分化能力.freela,HCC）因缺乏特异性肿瘤
5、抗原且抗原性弱，其生物治疗相对困难.树突状细胞(dendriticcells,.freelbrexBioscience公司；淋巴细胞分离液、细胞膜荧光染料PKH26，PKH67，500g/L聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)为美国Sigma公司产品；重组人GMCSF，IL4为美国PeproTech公司产品；新型重组人肿瘤坏死因子nrhTNF购自第四军医大学生物技术中心；ELISA检测试剂盒购自美国RD公司；抗人FITCCD80,HLADRmAb与抗人PECD86,CD83mAb均为美国BDPharMingen公司
6、产品.1.2方法以血细胞分离机分离富集HCC患者外周血单个核细胞（PBMCs），淋巴细胞分离液密度梯度离心纯化，无血清Xvivo15培养液重悬细胞，置于24孔聚苯乙烯培养板，贴壁法移去悬浮细胞，贴壁细胞加入rhGMCSF（终浓度100μg/L）,rhIL4（终浓度10μg/L），于37℃,50mL/LCO2条件下培养5d，补加上述细胞因子，7d收获DCs.上述悬浮细胞采用尼龙毛柱分离法分离T细胞，于含IL2（终浓度20kU/L）的无血清培养液Xvivo15中培养.人肝癌细胞HepG2和白血病细胞K562为我室保留株，于含100mL/L
7、胎牛血清的RPMI1640培养液中常规培养.HepG2细胞（经30Gyγ射线照射）与DCs分别以红色荧光染料PKH26和绿色荧光染料PKH67染色（染色过程按产品说明书进行），1∶3比例混合，37℃水浴中缓慢加入预热的PEG+DMSO,90s内完成，加入10倍体积RPMI1640终止反应；离心后细胞重悬于Xvivo15培养液中，加入前述细胞因子并补加1kUnrhTNFα（终浓度为1MU/L），37℃,50mL/LCO2培养24h，收集贴壁生长细胞，倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞形态.以PECD80,CD83,FITCCD8,HLADR
8、mAb标记DCs，具体方法：分别收集融合前DCs，融合细胞（未经荧光染料标记），调整细胞密度5×109/L，各取50μL，加入1∶20灭活兔血清10μL,4℃封闭10min，分别加入上述mAb,4℃避光30min后，PB
