α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影响.doc

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1、a-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-3873(2011)03-0002-02【摘要】目的观察a-ZAL对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的作用。方法酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞;应用MTT法测定成骨细胞增殖。结果a-ZAL能促进大鼠颅骨成骨细胞增殖，最佳浓度为10-7mol/L和10-10mol/L。结论a-ZAL可促进成骨细胞增殖和分化。【关键词】a-玉米赤霉醇；细胞培养；成骨细胞Effectofa-ZALonosteoblastsculturedinvitroGaoWen,DuanFei1,LiShaochun,et

2、al.(CollegeofBasicMedicalScienceofHebeiUniversity,Baoding071000,China)[Abstract]Objective：ToinvestigatetheeffectofEffectofa-ZALonosteoblastsculturedinvitro.Methods：OsteoblastswereobtainedfromthecalvariaofnewbornSDratswithenzymaticdigestionmethod・Theeffectofa-ZALontheproliferationofosteoblastswas

3、determinedbyMTTassay.Result：a-ZALincreasedosteoblasticproliferationatconcentrationof10~7mol/L,10~10mol/L.Inthistwoconcentration,theycaninhibitosteoblastdeath.a-ZALcanpromotetheproliferationofosteoblasts.［KEYWORDS］a-ZAL；cellculture；Osteoblast；a-玉米赤霉醇(a-ZAL)是天然内源性植物激素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的还原产物，属

4、于二轻基苯酸内酯类化合物，具有促生长效应，与高等植物的发育有关，广泛存在于豆类、谷物等多种植物中［1］。a-ZAL结构与雌激素非常近似，初步的实验研究［2-3］发现，它具有与雌二醇类似的抗动脉粥样硬化及抑制组织因子分泌等作用，可产生心血管保护效应，同时对于由切除卵巢及由B淀粉样蛋白所致神经细胞损伤，对模拟阿尔茨海默氏病(AD)模型小鼠均有保护作用，作用与雌二醇相似。由于其结构与雌激素非常近似，其生物功能也同雌二醇相似，所以植物雌激素a-玉米赤霉醇可能对于绝经后骨质疏松症能产生雌激素样治疗作用。本研究将通过对体外成骨细胞的培养来探讨a-ZAL对成骨细胞增殖、分化以及凋亡等各方面的影响。1

5、实验材料与方法1.1试剂与药物17B雌二醇购自SIGMA公司、a玉米赤霉醇为DR.ehrenstorferGmbh公司产、碱性磷酸酶测定试剂盒购自保定长城临床试剂有限公司，二甲基亚枫(DMS0)为AMRESCO公司产，胰蛋白酶为AMRESC0公司产、II型胶原酶购自SIGMA公司。1.2动物SD孕鼠（河北医科大学动物中心提供）合格证编号：10040781.3实验方法1.3.1大鼠成骨细胞的分离培养取一日龄SD大鼠十只，断颈椎处死后，放入75%的酒精中，10分钟，酒精中取出小鼠，取下头盖骨；用PBS洗涤头盖骨两次；于青霉素小瓶内将头盖骨剪成泥状，加入0.25%胰蛋白酶379消化20min

6、后，用PBS洗涤，吹打沉淀，吸弃上清液;加入0.1%胶原酶37£消化lh后，加细胞培养液，吹打均匀；重复一次，于离心机以lOOOrpm的速度，离心15min，使细胞沉淀，加入含10%胎牛血清的DMEM培养液培养，24h后换液，以后隔日换液1次。培养至第4-7天，细胞长成致密单层，铺满培养瓶底，进行传代。1.3.2成骨细胞鉴定:采用钙钻法碱性磷酸酶（ALP）染色进行成骨细胞鉴定。ALP阳性结果为成骨细胞胞浆呈灰黑色。1.3.3成骨细胞增殖活性检测（MTT法）将第3代成骨细胞传代接种于96孔板，细胞密度为5X104个/ml,以100uL/孔加入96孔板，细胞贴壁后，除去上清液，每孔分别加入

7、a-ZAL终浓度各为10-5mol/L,10-6mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L,10-9mol/L,10-10mol/L,E2组浓度10-10mol/L,阴性对照组（无水乙醇相应浓度），空白对照组，每组设4个复孔。a-ZAL,E2用无水乙醇溶解。培养20小时弃去上清液，每孔加入5mg/mlMTT液1537°C孵育4小时后，弃去上清液，每孔加入150uLDMS0溶液，震荡5分钟，于酶标仪490nm处检测0D值。1.结果1.1成