石斑鱼肠道原籍嗜冷杆菌(Psychrobacter sp.)SE6作为益生菌的体内外评价.pdf

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1、第34卷第2期2012年3月海洋学报ACTAOCEANOI。0GICASINICAV01．34．NO．2March2012石斑鱼肠道原籍嗜冷杆菌(Psychrobactersp．)SE6作为益生茵的体内外评价杨红玲1，马如龙1，孙云章1’2”(1．集美大学水产学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建厦门361021；2．集美大学水产学院饲料检测与安全评价厦门市重点实验室，福建厦门361021)摘要：研究了石斑鱼肠道原籍嗜冷杆菌SE6在体外的抑菌特性及对人工胃肠液的耐受特性，在此基础上研究了饲料中添加SE6(108CFU／g)对斜带石斑鱼生长性能和免疫功能的影响。

2、体外试验结果表明：SE6对副溶血弧菌、哈维氏弧菌、梅氏弧菌和金黄色葡萄球菌等常见水产致病菌均有一定的抑制作用。pH为卫．0的人工胃液能促进SE6的生长，处理2和4h存活率分别为110．7％和173．0Voo；pH为3．0的人工胃液处理2h后活菌数为1．59×105CFU／cm3，存活率为1．36％，但SE6不能耐受pH为2．0的人工胃液。经浓度分别为0．1％，0．3％，0．5％和0．7％的胆盐处理3h后，SE6的存活率分别为89．17％，88．33％，77．17％和12．33％。动物试验结果显示：投喂SE660d后试验组饵料系数(o．95±0．01)显著低于对照组(1．03

3、±0．02)。试验组血清补体C3在试验全期均高于对照组，补体c4含量在投喂SE660d时显著上升。血清IgM含量在投喂30d时显著上升。总之，嗜冷杆菌SE6能抑制多种常见病原菌的生长，而且对模拟胃肠道环境具有一定的耐受能力，添加到饲料中能显著提高石斑鱼饵料利用率，增强动物的免疫功能。关键词：嗜冷杆菌；斜带石斑鱼；抑菌活性；生长性能；免疫中图分类号：s917．1文献标志码：A文章编号：0253—4193(2012)02—0129—071引言石斑鱼(Epinephelusspp．)是一类名贵海水鱼，目前已经成为我国东南沿海的重要养殖经济鱼类之一，然而随着养殖密度的增加，各种疾病

4、频繁发生，给石斑鱼养殖业带来严重的经济损失口]。目前养殖过程中主要通过大量使用抗生素和消毒剂等化学药物来防治鱼病，虽然取得较好效果，但这些药物的长期和大量使用不仅造成环境负效应，还导致耐药菌株增多和药物残留等问题，人类食用这种鱼将会危害其健康。因此，绿色、环保的微生态制剂正成为当前研究和开发的热点[2-3]，然而鱼用益生菌的使用效果并不稳定，其中一个很重要的原因可能是许多菌株来自于环境或恒温动物，难以耐受鱼类胃肠道的特殊环境而不能定植或定植时间很短，发挥的益生作用有限[4_5]。因此，一些研究者认为理想的益生菌最好来自于动物自身消化道[2’5]。本实验室在研究不同生长速度的

5、斜带石斑鱼幼鱼的肠道微生物及其功能时发现嗜冷杆菌(Psychrobactersp．)SE6为生长速度较快的幼鱼肠道的优势菌，可能与动物的生长和健康有关[6J。本实验采用体内外试验相结合，首次研究了嗜冷杆菌SE6的抑菌特性、对收稿日期：201104—09；修订日期：2011-08—09。资助项目：国家自然科学基金(30600461)；福建省高校杰出青年科研人才计划(JAL0183)；福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室基金(2009J102)。作者简介：杨红玲(1976一)，女，湖北省石首市人，讲师，硕士，主要从事水产微生物学研究。E—mail：honglingyang

6、@sina．corn*通信作者：孙云章，副教授，博士，主要从事鱼类消化道微生物与功能研究。E—mail：sunyunzhang@yahoo．com．ca130海洋学报34卷模拟胃肠道环境的耐受能力及其对石斑鱼幼鱼生长性能和免疫功能的影响，综合评价其作为海水鱼益生菌的可能性。2材料与方法2．1菌种和培养基嗜冷杆菌SE6分离自健康的斜带石斑鱼(Epi～nepheluscoioides)肠道，利用生化鉴定结合16SrRNA基因测序分析，SE6被鉴定为嗜冷杆菌(P5yc危ro沈c≠8rsp．)[6

7、。抑菌试验所用的指示菌为副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、

8、哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)、梅氏弧菌(Vibriometschniko～vi)和金黄色葡萄球菌(S缸p^yzo∞ff甜s(．2．U'FeUS)。嗜冷杆菌SE6和指示菌的培养、双碟制备均用营养肉汤培养基。2．2抑菌试验嗜冷杆菌SE6于营养肉汤中28℃培养48h。培养液通过管碟法进行抑菌试验，28℃培养24h后测定抑菌圈直径，试验设3个重复‘7

9、。2．3人工胃液耐受试验人工胃液的配制参照孙云章等嘲的方法，首先配置pH值为2．0，3．0和4．0的稀盐酸溶液，溶液经100℃灭菌10rain，冷却至40℃左右时