Th1-Th2类细胞因子对哮喘大鼠脾淋巴细胞神经生长因子表达的影响【大学临床医学毕业论.doc

《Th1-Th2类细胞因子对哮喘大鼠脾淋巴细胞神经生长因子表达的影响【大学临床医学毕业论.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、临床医学论文・Thl/Th2类细胞因子对哮喘大鼠脾淋巴细胞神经生长因子表达的影响作者：代继宏，王永红，何海霞【摘要】目的：初步探讨IL13和IFN/对支气管哮喘大鼠脾淋巴细胞神经生长因子NGF表达的影响.方法：建立Wistar大鼠哮喘模型，分离脾淋巴细胞并培养，通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)半定量法测定NGFmRNA的基础，12h，24h水平，并观察予以干扰素(IFN7)和白细胞介素13(IL13)干预后NGFmRNA表达的情况.结果：哮喘大鼠脾淋巴细胞在基础状态下具有表达NGFmRNA的功能，并在ConA刺激下呈时间依赖性增强IL13组随着干预时

2、间的延长基础NGFmRNA表达量逐渐升高，呈现时间和浓度依赖性，并且至12h后分别高于各吋间点的空白对照组(均P<0.01).而随着IFN丁干预浓度的依次增高，NGFmRNA表达相对値却逐渐降低，也表现山浓度和时间依赖特征.结论：在哮喘中Th2类细胞因子IL13可上调淋巴细胞NGFmRNA表达，Thl类细胞因子IFN7可下调淋巴细胞NGFmRNA表达，两者均呈时间和浓度依赖性；Thl/Th2类细胞因子免疫失衡可能通过调控NGFmRNA表达间接促进其诱导神经源性气道炎症.【关键词】哮喘；神经生长因子；白细胞介素13；干扰素II型0引言哮喘是严重威胁公众健康

3、的疾病，冃前该病的病因、发病机制还不十分清楚，相关硏究已经证实在哮喘发病过程中，丁细胞亚群(特别是Thl/Th2)功能失衡在哮喘发病中有重要作用.白介素13(IL13)和7干扰素(IFN7)分别是Th2和Th1效应细胞的细胞因子，在哮喘发病机制中，两者之间的不平衡是弓I起免疫球蛋白E(IgE)产生异常和哮喘发病的重要因索，即Th2细胞占优势的反应导致一系列由IgE介导的变应性炎症〔1〕・然而，在Thl/Th2失衡中占主导作用的免疫细胞与神经元的相互作用机制仍不清楚.神经生长因子(nervegrowthfactor5NGF)是神经营养因子家族中的成员之一，

4、其主要功能是调控神经元的生长与分化.硏究表明，NGF作为神经可塑性调控因子，通过诱导神经源性炎症反应参与哮喘发病〔2〕.我们通过建立大鼠哮喘模型，探讨大鼠体内Thl/Th2免疫失衡和神经源性炎症之间的关系.1材料和方法1・1材料4只雄性Wistar大鼠由重庆医科大学实验动物中心提供，鼠龄4〜6wk，体质量120〜200g，饲养1wk后建立大鼠哮喘模型.大鼠IL13和IFN7(上海生工生物工程技术服务有限公司合成)；Ficol1Hypaque分层液及刀豆素(ConA)购于美国Sigma公司;总RNA抽提试剂盒购于华美生物工程有限公司；逆转录试剂盒购TPro

5、mega公司；Taq酶购T*TaKaRa公司；Trizol试剂购于美国MolecularResearchCenterNGF的ELISA试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司.PE4500PCR热循环仪系美国Signm公司出品；Avant30低温高速离心机和Du70全自动紫外分光光度计系美国Beckman公司出品.1・2方法1.2.1哮喘模型的建立每只大鼠腹腔内注射抗原液ImL(其屮含鸡卵蛋白100mg，灭活百日咳杆菌疫菌5x109个和氢氧化铝干粉100吨)致敏，2wk后开始舟超声雾化器每日给予10g/L鸡卵蛋白雾化吸入60min激发哮喘，观察症状，连续2w

6、k，建立哮喘模型〔3〕・取肺组织行病理检测.1.2.2细胞分离、培养及干预1.2.2.1脾淋巴细胞分离以颈椎脫臼法处死大鼠，放入盛75mL/L乙醇的烧杯中浸泡2〜3min后置超净工作台上，用无菌眼科剪和眼科组织弯钳取脾，并置于盛有冷DHanks液(10mL)培养皿中的筛网上，剪成2〜3段，用2mL注射针芯捻碎.将细胞悬液移入10mL离心管中，离心(1500r/minx5min)，弃上清后加入6mLTrisNHC1破坏红细胞，用吸管吹打混匀后室温下放置5min，离心(1500r/minx5min)?弃上清?DHanks液重悬细胞；取5mLFieol1Hyp

7、aque分层液(比重为1.087)于另一离心管底部，将细胞悬液轻铺分层液表面离心(400r/minx20min)?吸取单核细胞层；DHanks液洗涤细胞3次5加RPMI1640培养液10mL悬浮细胞，将脾单核细胞悬液移入培养皿中，置37C培养箱中贴壁1h，使单核/巨噬细胞黏附于玻璃壁上，用毛细吸管吸出未贴壁的淋巴细胞悬液.取100"L脾淋巴细胞悬液稀释后用0.4g/L的台盼蓝染色，计数并观察细胞活力；调整脾细胞浓度为5X1010/L・1.2.2.2脾淋巴细胞培养孵育及干预脾淋巴细胞以终浓度5X1010/L的密度接种于24孔培养板中'培养在含有100mL小

8、牛血清、青霉索、链霉索各1万U/L，ConA为10kg/L的1640细胞培养基中