荧光定量pcr检测hcv核酸提取法临床价值研究

《荧光定量pcr检测hcv核酸提取法临床价值研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、荧光定量PCR检测HCV核酸提取法临床价值研究　　【摘要】目的使用RQPCR比较氯仿异丙醇法和核酸分离柱法提取HCVRNA的临床价值。方法分别用两种核酸提取法提取相同患者的HCVRNA后，采用RQPCR技术检测HCVRNA含量，对两种方法的提取效率和重复性进行对比。结果两种方法均能较好地提取RNA，且提取效率相近（P>005），但是核酸分离柱法在重复性上更加优于氯仿异丙醇法。结论两种方法均可被临床采纳，但是核酸分离柱法重复性更高，且毒性低，值得推广。【关键词】荧光定量聚合酶链反应；丙型肝炎病毒核酸；核酸分离柱；氯仿异丙醇提取法Analysisof

2、clinicalvalueofHCVnucleicacidextractiondetectedbyfluorescentquantitativepolymerasechainreactionZHANGWeimin，GONGwenboShenzhenPeople’sHospital，Guangdong518020，China【Abstract】ObjectiveTocomparetheextractionefficiencyandclinicalvalueofthetwomethodsofHCVnuclear5acidextraction，whic

3、hisisopropanolchloroformnuclearacidextractionandseparationcolumnnuclearacidextraction，bythedetectionoffluorescencequantitativePCRMethodsAfterextractingRNAofHCVwithtwomethods，whichwasisopropanolchloroformnuclearacidextractionandseparationcolumnnuclearacidextraction，fluorescenc

4、equantitativePCRwasusedtodetectthecontentoftheRNAthencomparedtheextractionefficiencyandrepeatabilityofthetwomethodsResultsBothoftwomethodscouldeffectivelyextractRNATherewasnosignificantdifferenceintheextractionefficiency（P>005），butwhencometotherepeatability，themethodwhichused

5、nucleicacidseparationcolumnshowedsignificantadvantageConclusionThetwomethodsaresimilarandbothcanbeadoptedonclinicalapplication，butthemethodusednucleicacidseparationcolumnismoreexcellentontherepeatability.【Keywords】Fluorescencequantitativepolymerasechainreaction；HepatitisCviru

6、sRNA；Nucleicacid5separationcolumn；Isopropanolchloroformnuclearacidextraction作者单位：518020曁南大学第二附属医院/深圳市人民医院检验科通讯作者：谢亚琴丙肝是因感染丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）引起的病毒性肝炎，主要是通过母婴、血液和体液传播[1]。丙肝病理机制主要为免疫病理损害，因其易发展为肝硬化或肝癌，临床对此疾病重视程度很高。HCV属黄病毒科，拥有单股正链RNA[2]，临床上主要以HCVRNA含量作为丙肝的确诊实验，而常选用的丙型肝炎病毒

7、RNA荧光定量检测试剂盒中上核酸的提取方法通常有两种，即氯仿异丙醇法和核酸分离柱法。现对两种核酸提取法结果和重复性进行对比，其结果如下。1资料与方法11一般资料标本来源为本院2011年3月至2012年6月间肝炎门诊初步诊断为丙型肝炎患者血清120份。其中男性65人，女性55人。男性平均年龄为（562±21）岁，女性平均年龄为（551±19）岁。血清标本内部差异无统计学意义。12仪器与试剂5Roche公司LightCycler荧光定量PCR分析仪。氯仿异丙醇法和核酸分离柱法提取试剂及扩增试剂均购自凯杰生物工程（深圳）有限公司，试剂盒最低检测限为50

8、×1012IU/mL。检测抗HCV采用第三代ELISA抗HCV试剂盒。13方法分别按试剂盒的说明书进行RNA提取，然后再使用仪器对其扩增