抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化酶活性的测定.ppt

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1、抗坏血酸氧化物酶和多酚氧化酶活性的测定制作人：车永梅单位：生命科学学院一、实验目的:掌握测定抗坏血酸氧化酶、多酚氧化酶活性的方法，使学生理解诸如：果实受伤、组织变褐的原因等。二、实验原理利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量表示抗坏血酸氧化酶的活性：+O212抗坏血酸氧化酶抗坏血酸脱氢抗坏血酸H2OCOOOOHHCH2OHCCCCHOCOOHOHOHHCH2OHCCCCHO+抗坏血酸+脱氢抗坏血酸2HICOOOOHHCH2OHCCCCHOCOOHOHOHHCH2OHCCCCHOI2+利用碘液滴定剩余抗坏血酸儿茶酚＋O2儿茶醌

2、＋H2O多酚氧化酶儿茶醌+抗坏血酸→儿茶酚＋脱氢抗坏血酸利用利用单位时间内单位植物材料抗坏血酸的氧化量间接表示多酚氧化酶的活性：梨果肉三、实验材料四、实验步骤1．酶液提取2．酶活性的测定（按下表配制反应体系）瓶号缓冲液抗坏血酸焦儿茶酚偏磷酸酶溶液偏磷酸(保温一定时间后)14221242213421214321215321216321121(1)抗坏血酸氧化酶活性按下式计算：抗坏血酸氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)]=[V′-(V1-V2)]×0.44(V/a)/(w×a)式中：V′=滴定3号空白所用去的碘液毫升数；

3、V1=滴定1号瓶所用去的碘液毫升数；V2=滴定2号瓶所用去的碘液毫升数；0.44=每毫升5/6mmol碘液氧化抗坏血酸毫克数；V=提取液总体积（ml）；a=测定时所用提取液的ml数w＝样品鲜重(g)t＝测定时间(分)。五、试验结果(2)多酚氧化酶活性：多酚氧化酶活性[氧化抗坏血酸毫克数/(克鲜重·分)]=[(V″-(V3+V4))/2-(V′-(V1+V2))/2]×0.44×(V/a)/(W×t)式中，V〞＝滴定6号空白用去的碘液毫升数；V3＝滴定4号瓶用去的碘液毫升数；V4＝滴定5号瓶用去的碘液毫升数；其余符号意义同前。六、

4、思考题1.多酚氧化酶活性测定实验中计算多酚氧化酶活性时为什么要减去抗坏血酸氧化酶活性？2.测定多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性时加入偏磷酸的作用是什么？