动物细胞工程课件.ppt

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1、2.2动物细胞工程2.2动物细胞工程生产单克隆抗体常用技术手段动物细胞工程动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段技术：皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要被身体排斥。如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有

2、限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？动物细胞培养技术从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念原理：细胞增殖人耳鼠“人耳鼠”再出风头2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动——这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，

3、心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。动物细胞培养过程1、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官原因：细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。2.将组织细胞分散成单个细胞将组织块剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，这样组织就会分散成单个细胞。思考：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？①单个细胞容易和周围环境进行物质交换——获得营养物质、氧气等，排出代谢废物；②分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他技术得以实现。1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？P44旁栏用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是

4、蛋白质。不能用胃蛋白代替因为两者的最适pH不同，动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（最适pH2.0）没有活性，而胰蛋白酶(最适pH7.2-8.4)的活性较高。胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？P44寻根问底胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。动物组织单个细胞细胞悬液贴壁生长分瓶培养10代细胞50代细胞不死细胞原代培养传代培养胰蛋白酶剪碎加培养液接触抑制少数癌变少数3.配制细胞悬液，进行原代培养及传代培养1、细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞

5、贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。2、细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。细胞接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养4.如何界定原代培养和传代培养？随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖⑴原代培养:将动物组织消化后的初次培养。⑵传代培养:对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。动物组织块细胞悬液原代培养传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理

6、分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎动物细胞培养过程细胞贴壁接触抑制原代培养传代培养加入培养液用胰蛋白酶等处理贴壁细胞适宜条件不死性细胞多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？P46讨论充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）适宜温度、PH和气体环境；无菌无毒环境无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境。4、体外培养动物细胞需要物质和环境条件⑴无菌、无毒的环境①对培养液、培养用具进行

7、无菌处理；②在培养液中加抗生素；③定期更换培养液。⑵充的营足养葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血浆或血清为什么要加血清呢？⑶温度和PH36.5±0.5℃；PH=7.2―7.4⑷气体环境——O2和CO2C02的主要作用是维持培养液的PH。含95%空气加5%CO2混合气体1、大规模的生产生物制品。2、作为基因工程的受体细胞。3、检测判断物质的毒性。4、用于生理、病理、药理等方面的研究。三、动物细胞培养技术的应用：5、培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植1、大规模的生产生物制品。2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。3、检测判断物