丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织TRPM2和EndoG的影响.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterTheeffectsofD1-butylphthalideontheexpressionsofTRPM2andEndGafterchroniccerebralischemiainagedrasByHuifangZhangSupervisor：Prof．LuHongNeurologyTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,April2011f．．原创性声明本人郑重声明：所呈交的学

2、位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均在文中以明确的方式标出，本申明的法律责任有本人承担。学位论文作者：孤在煞日期：加“年岁月1歹同学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检

3、索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：她萝ILl期：二DIf年罗月≯歹日、1．摘要丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织TRPM2和EndoG的影响研究生张会芳导师卢宏郑州大学第一附属医院郑州450052摘要背景和目的慢性脑缺血是大脑长期处于低灌注的一种病理状态，它可导致脑细胞氧和葡萄糖供应不足，引起一系列神经功能障碍。随着世界上老龄人口所占比率不断上升，慢性脑缺血及其伴随性疾病逐渐

4、增多，引起的认知减退和退行性神经系统疾病对生活质量和社会经济造成重大影响。故而，探讨慢性脑缺血损伤的发病机制，提出有效的预防和治疗措施迫在眉睫。瞬时感受器电位M2型(transientreceptorpotentialmelastain2,TRPM2)通道是近年来新发现的非谷氨酸依赖的阳离子通道，在中枢神经系统的神经元和神经胶质细胞中均有表达，在缺血缺氧损害及各种有害因素的作用下，细胞膜上的TRPM2通道被激活，并介导钙离子的出入胞活动，导致钙超载，并诱导细胞凋亡。TRPM2作为新发现的阳离子通道，在缺血性神经系统疾病中的作用成为当前研究的热点

5、之一。核酸内切酶G(endonucleaseG，EndoG)是一种钙离子依赖性内切酶，其诱导凋亡的方式不依赖caspases途径。在慢性脑缺血损伤中，细胞内的钙超载以及缺血过程中产生的tBid、Bax能够诱导EndoG自线粒体中释放到包浆中，并随摘要即转位至胞核中，引起线粒体断裂，导致细胞凋亡。丁基苯酞(d1．butylphthalide，NBP)对急性脑缺血具有较好的疗效，但在慢性脑缺血中是否通过影响TRPM2和EndoG而发挥神经保护作用尚未见报道。本文旨在观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠脑组织中TRPM2和EndoG蛋白表达的影响，深入了

6、解丁基苯酞对慢性脑缺血脑组织的神经保护作用，为慢性脑缺血的有效预防和治疗提供理论新的思路。材料和方法选取80只质量为45旺5509的清洁级Wister大鼠，7天的适应性饲养，经水迷宫测试合格后用于试验。大鼠随机分为4组，每组20只，A组：对照组(假手术)；B组：模型组(手术+溶剂)；C组：缺血丁基苯酞低剂量治疗组(手术+低剂量+溶剂)；D组：缺血丁基苯酞高剂量治疗组(手术+高剂量+溶剂)。采用双侧颈总动脉永久结扎(BCAL)，建立慢性脑缺血动物模型，术后2个月，morris水迷宫测试大鼠学习和记忆功能。A组和B组予以溶剂(消毒花生油)灌胃，C组

7、和D组分别予以丁基苯酞60mg／kg／d、120mg／kg／d灌胃。灌胃1个月后，再次经morris水迷宫测试大鼠学习和记忆功能，然后麻醉大鼠，开胸暴露心脏，以生理盐水200ml经心脏加压快速冲洗，驱除血管内血液，断头取脑，置于4％多聚甲醛内固定24小时，常规脱水、透明、浸蜡、包埋。冠状位切片：片厚4um，HE染色观察脑组织形态学变化，免疫组化(sP)法染色检测TRPM2、EndoG的表达变化。数据以均数士标准差(出)表示，SPSS13．0统计软件进行分析，多组问比较采用单因素方差分析(One．way．ANOVA)，两组间比较采用LSD．t检验

8、，检验水准为a=0．05。结果1．实验动物的一般行为观察术前大鼠表现活泼，反应敏捷，能自主摄食和饮水，术后早期，B、C、D各组大鼠精神萎靡，食欲不振，