丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠脑内gcsf和tnfα表达的影响论文

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1、丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠脑内GCSF和TNFα表达的影响论文王书霞滕军放康康曾芳【摘要】目的研究丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠脑内GCSF和TNFα表达的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎(2VO)制备慢性脑缺血模型，治疗组大鼠给予丁基苯酞灌胃，免疫组织化学法多克隆抗体GCSF和TNFα标记大鼠脑内梗死区神经元、血管内皮、胶质细胞。持久性2VO2个月。结果治疗组大鼠脑内GCSF明显增多,TNFα明显减少。结论丁基苯酞能增加2VO大鼠脑内GCSF的表达并能减少TNFα的表达，促进慢性

2、脑缺血的代偿修复。【关键词】丁基苯酞；慢性脑缺血；GCSF；TNFα慢性脑缺血是指各种原因导致的长期脑灌流不足,促使脑组织发生一系列病理及生化改变的慢性疾病,是血管性痴呆(VD)、Binser病(AD)等多种疾病发展过程中的共同病理过程。其治疗关键在于尽快恢复缺血区的血供,挽救濒死的神经元、神经胶质和血管内皮细胞，促进脑功能恢复。粒细胞集落刺激因子(GCSF)是造血生长因子家族中的一个成员，GCSF可诱导内皮细胞的迁移和增殖，增加脑卒中后的新生血管〔1〕，并具有神经保护和抗炎特性〔2.fr

3、eelg／kg)腹腔内注射麻醉，钝性分离双侧颈总动脉，每侧用0号手术线分别结扎颈总动脉的远心端与近心端，从中间剪断，缝合皮肤。假手术组只分离双侧颈总动脉，既不结扎也不剪断。1.3.2给药方法低剂量治疗组和高剂量治疗组于造模2个月后分别按60、120mg/kg给予NBP每日灌喂，NBP用花生油稀释至2ml。对照组和单纯缺血组于造模2个月后每日给予花生油2ml灌喂，各组皆连续灌喂1个月。1.3.3标本制作分别取实验组及对照组大鼠，10％水合氯醛麻醉，250ml生理盐水(37℃)经心脏灌注快速冲洗血细胞

4、，用4％多聚甲醛(4℃)250ml灌注。直到大鼠全身僵硬为止，快速开颅，取出全脑，去除脑干和小脑，4％多聚甲醛固定24～48h，石蜡包埋后3μm厚连续切片。1.3.4阳性细胞的辨认和计数免疫组化阳性细胞显色为棕黄色，GCSF为神经元细胞、内皮细胞胞浆及胶质细胞胞核着色，TNFα为神经元细胞胞浆着色，计数方法：对每张玻片随机取5个高倍镜视野，计数5个高倍视野内的阳性细胞总数，取平均值作为计数结果。1.4统计学处理数据以x±s表示，采用SPSS12.0行多组间单因素方差分析LSD法行两两比较。2结

5、果2.1NBP对大鼠皮层和海马结构中GCSF表达的影响GCSF表达主要见于皮质和海马的神经元、血管内皮细胞胞浆和神经胶质细胞胞核，阳性表现为棕黄色或褐黄色着色。对照组皮层和海马的GCSF呈少量表达，单纯缺血组皮层和海马的GCSF表达与对照组差别无统计学意义（P＞0.05），低剂量治疗组和高剂量治疗组皮层和海马的GCSF表达明显多于单纯缺血组（P＜0.05），且高剂量治疗组皮层和海马的GCSF表达明显多于低剂量治疗组（P＜0.05），见表1。2.2NBP对大鼠皮质和海马中TNFα表达的

6、影响TNFα表达主要见于皮质和海马的神经元细胞胞浆，胞浆呈棕黄色。对照组皮层和海马的TNFα呈少量表达，单纯缺血组皮层和海马的TNFα表达明显多于对照组（P＜0.05），低剂量治疗组和高剂量治疗组皮层和海马的TNFα表达明显少于单纯缺血组（P＜0.05），且高剂量治疗组皮层和海马的TNFα表达明显少于低剂量治疗组（P＜0.05），见表2。表1各组大鼠不同脑区GCSF阳性细胞数的比较与单纯缺血组比较：1）P＜0.05；与低剂量治疗组比较：2）P＜0.05，下表同表2各组大鼠不同脑区TNF

7、α阳性细胞数的比较3讨论GCSF是一种20kD的蛋白质，是细胞生长因子家族的一员。小鼠GCSF与人类GCSF的蛋白序列同源性高达73%，因此重组人GCSF可用于小鼠实验〔5〕。可产生GCSF的细胞有血管内皮细胞、成纤维细胞、神经胶质细胞、骨髓基质细胞、单核细胞、巨噬细胞和上皮细胞〔5〕。以前对GCSF的研究局限于造血和心血管系统，现已有研究证明GCSF在大脑的诱导是减少脑缺血损害的内在应激反应〔6〕，其促进脑缺血后脑功能恢复的作用为：①除造血因子的功能外，还可以诱导内皮细胞的迁移和

8、增殖，增加脑卒中后的新生血管〔2〕，而血管发生密度是脑卒中后神经元存活的决定因素〔7〕，增强了神经元的代偿修复；②可动员骨髓干细胞到外周血，且血液中的骨髓基质细胞可优先迁移到受损的脑组织，释放某种营养因子〔8〕，并分化为神经元和胶质细胞〔9〕，从而增加神经元的数目，并增强其代偿修复；③在复杂的细胞因子网络中，GCSF可能直接增加脑内的营养因子，促进神经功能修复。TNFα作为一种具有广泛生物学活性的细胞因子，在慢性脑缺血中的表达研究较少，TNF前体为含有信号肽、分子量为26kD、