丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠学习记忆能力和gfap、mbp的影响

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1、郑州大学2006届硕士研究生毕业论文丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠学习记忆能力和GFAP、MBP的影响研究生常文广导师滕军放教授郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052摘要缺血性脑血管病是神经科学研究的重要课题之一，多年来国内外的研究主要集中在急性缺血性脑损伤，而对慢性脑缺血引起的学习记忆障碍缺乏深入系统的研究。慢性脑缺血作为神经系统的一种常见病理状态，伴发于脑动脉硬化、脑血管性痴呆、阿尔茨海默病(AlzlIeimer’sDiscase，AD)、BinswaIIger病及动静脉畸形等多种疾病的病理过程中，发病早期以认知功能损害为主要表现，最终可导致持久或进

2、展性的认知与神经功能障碍。随着时间推移，我国进入老龄化社会，预防、治疗主要由慢性脑缺血带来的认知功能障碍就日益显得重要。大量研究证实，慢性脑缺血引起的神经元缺失、白质损伤可导致认知功能障碍。皮层和海马神经元是参与学习和记忆的重要结构，因此，皮层和海马神经元缺陷可引起学习和记忆能力受损。慢性脑缺血后白质改变包括少突胶质细胞减少，星形胶质细胞和小胶质细胞增生活化。星形胶质细胞是中枢神经系统内数量最多的神经细胞，几乎占脑容量的50％以上，对神经元的存活、脑组织的修复起着重要作用，同时，大量的星形胶质细胞增牛，又会影响神经纤维的传导和突触的构建。胶质纤维酸性蛋白(G

3、FAP)是星形胶质细胞合成的重要骨架蛋白，是星形胶质细胞的特征性标志。髓郑州大学2006届硕士研究生毕业论文摘要鞘是少突胶质细胞包卷轴突而成，髓鞘碱性蛋白(MBP)是中枢神经髓鞘的主要成分，由少突胶质细胞分泌和合成，具有神经组织特异性，其含量变化可反映脑白质少突胶质细胞髓鞘的损伤的程度。丁基苯酞(dl-butylphthalide，NBP)是从芹菜籽中提取出来，后经人工合成，为治疗脑缺血的一种新药。经研究发现NBP对可改善小鼠全脑缺血脑能量代谢，可以增加局部脑缺血大鼠缺血区的脑血流，能缩小大鼠大脑中动脉结扎后(McAO)梗塞的面积和改善神经功能缺失，能改善M

4、CAO大鼠记忆功能障碍等，但多集中在急性缺血上的研究。本文利用2vO建立慢性脑缺血模型，通过Morris水迷宫评价大鼠行为学变化，光学显微镜、透射电镜观察神经元的变化和超微结构，免疫组化观察MBP和GFAP在相应脑区的表达，旨在探讨NBP对慢性缺血引起的认知功能障碍的影响及其作用机制。材料方法1．实验动物与分组健康wistar大鼠80只，随机分为A组：对照组(假手术+溶剂)；B组：单纯缺啦组(手术+溶剂)；c组：缺血低剂量治疗组(手术+低剂量NBP+溶剂)；D组：缺血高剂量治疗组(手术+高剂量NBP+溶剂)；c组和D组于造模2月后分别按60m班g、120m眺

5、g给予丁基苯酞每日灌胃，丁基苯酞用花生油稀释至2ml。A组和B组每日给与花生油2ml灌胃，各组皆连续灌胃一个月。2．模型的制作钝性分离单纯缺血组和缺血高、低剂量治疗组大鼠双侧颈总动脉，用0号手术线分别结扎其近心端及远心端；分离对照组双侧颈总动脉但不结扎。术后各组大鼠均在常规条件下饲养。3．标本的制作手术3月后，每组取3只大鼠，断头后迅速取一侧海马CAl区1x1×2mm3大小的脑组织放入磷酸盐缓冲的4％戊二醛溶液中固定，供做电镜用，其它大鼠经心脏灌注后，用4％的多聚甲醛固定后做石蜡切片，供HE染色或做免疫组化用。Ⅱ郑州人学2006届硕士研究生毕业论文摘要4．观

6、察指标(1)各组于2VO前、2vO后2月、2v0后3月行Morfis水迷宫试验进行学习记忆能力的评价。(2)采用HE染色观察大鼠皮层和海马的神经元细胞变化(3)电镜观察大鼠皮层和海马的神经元超微结构。(4)免疫组化观察GFAP和MBP的表达5．统计方法所有数据均采用均数±标准差(xtJ)表示，应用SPSSl0．0统计软件进行数据处理，多组间比较采用单因素方差分析，用LSD法进行两两比较，取q=0．05作为显著性检验标准。结果1．实验动物一般情况术后大鼠均出现精神萎靡，反应迟钝，进食减少。术后1天，A组精神恢复；B、c、D组改善不明显。3-5天B、c、D组逐渐

7、恢复，1周时反应、进食正常。2．认知能力利用MoⅡis水迷宫测定学习和记忆功能发现，2vO前A、B、c、D组逃避潜伏期时间和跨过平台次数比较，差异没有统计学意义(P>0．05)；2VO后2月A组与B、C、D组比较逃避潜伏期时间明显延长，跨过平台所次数明显减少，差异均具有统计学意义(P<0．05)；2VO后3月c、D组与B组比较避潜伏期时间和跨过平台次数明显改善，差异具有统计学意义(P<0．05)，D组与C组比较避潜伏期时间和跨过平台次数也有所改善，差异具有统计学意义(P<0．05)。3．HE染色A组：皮质和海马偶有神经元细胞变性、死亡，大部分细胞形态正常；B

8、组：神经元细胞大量变性、死亡，神经细胞数目明显减少。