亚麻高效再生体系优化及抗除草剂bar基因的遗传转化研究.pdf

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1、Secrecy：No．ChineseAcademyofAgriculturalSciences‘’DissertationOptimizationofFlaxEfficientRegenerationSystemandBarGeneticTransformationMs．Candidate：JiaWanqiAdvisor：Prof．WangYufuMajor：CropGeneticsandBreedingSpecialty-BiotechnologyofFlaxJune2011独创性声明．本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：喷旎璃时间：-2．011年‘月B日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时fB--j：'20I1年石刖3El时间：

3、莎∽，『年舌月侈日璋惕钷．又y佩．移赘，一一之名：签名生签究师研导中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目亚麻高效再生体系优化及抗除草剂bar基因的遗传转化研究论文作者贾婉琪专业作物遗传育种研究方向分子育种指导教师干乐富培养单位(研究所、中心)麻类研究所姓名职称单位专业签名评王洪刚教授山东农业大学生物化学与分子生物学

4、阅人王晓武研究员生物化学与分子生物学

5、蔬菜花卉研究所答辩贮己国磋主欧阳西荣教授湖南农业大学作物栽培学与耕作学席锄矽熊和平研究员作物遗传育种麻类研究所答／’／7l王学华教授湖南农业大学作物栽培学与耕作学弼哮I辩们蛛唐守伟研究员作物栽培学与耕作学麻类研究所

6、委喻春明研究员作物遗传育种。新殇以贝麻类研究所荡狮肖爱平研究员农产品质量与食物安全．麻类研究所’I会议记录(秘书)彭瑛论文答辩时间地点2011年6月9号下午3点麻类所二楼学术报告厅摘要砸麻(LinumusitatissimumL．)是我国重要的纤维作物和油料作物，亚麻纺织品以其独特的品质倍受广‘大消费者青睐。亚麻生产的发展与高产、优质、多抗的新品种培育和推广是紧密联系的。随着生物技术的发展，利用遗传转化手段创新亚麻种质资源和培育新品种是一条非常有效的途径。本研究以纤维亚麻品种“派克斯”、“中亚2号”和“华星009”的下胚轴为试验材料，对其再生体系的建立及农杆菌介导转化过程中的关键因子

7、进行优化，以此为基础将抗除草剂bar基因导入距麻中。主要研究结果如下：(1)亚麻下胚轴组织培养再生体系的优化本研究对基因型、外植体的选择部位、基本培养基、植物生长调节剂等影响亚麻植株再生的因素进行了优化，建立了亚麻下胚轴高效组织培养再生体系。结果表明，亚麻种子消毒采用75％乙醇处理3min，再用0．1％升汞灭菌3min效果最好；亚麻下胚轴的下部是最佳外植体；在Y4培养基下(MSl+NAA0．02mg／l+6一BAlmg／1)，亚麻愈伤组织的诱导率和分化率最高，分别达到98．89％和95．56％；最佳生根培养基是I／2MS+NAAO．001mg／l；与派克斯和华星009相比，再生能力最

8、强的品种是中亚2号。(2)农杆菌介导的遗传转化体系的优化通过冻融法将植物表达载体pCAMBIA3301成功导入农杆菌LBA4404中，结合已经建立的亚麻高效再生体系，通过gus基因瞬时表达对农杆菌介导遗传转化过程中的主要影响因子进行了优化，包括筛选剂和脱菌抗生素浓度、外植体的预处理、农杆菌浸染条件、共培养时间等。并以除草剂PPT作为筛选剂，首次建立了亚麻品种“中亚2号”的较为高效的遗传转化体系。优化的参数主要有，bar基因筛选剂PPT浓度为1．5mg，l，npt口基因筛选剂卡那霉素浓度为50mg／l；脱菌抗生素为氨苄两林钠300mg／1、头孢曲松钠400mgA；下胚轴预培养3天之后轻

9、微剥皮处理，GUS瞬时表达率可达到96％；以MSl液体培养基做为农杆菌重悬液，调节菌液浓度OD锄=O．8，浸染30rain；最适共培养时间为4天等。(3)转基因植株的检测GUS组织化学检测共培养之后的瞬时表达情况，gus基因在组织内大量表达；通过对转化苗的GUS染色和PCR鉴定，初步确定了bar基因已经整合到亚麻基因组中。关键词：亚麻；再生体系；农杆菌；bar基因；遗传转化AbstractFlax(LinumusitatissimumL．)isallimp