小麦受体基因型与再生体系的优化及AntiTrxS基因的遗传转化

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1、河南农业大学硕士学位论文小麦受体基因型与再生体系的优化及Anti-TrxS基因的遗传转化姓名：余桂荣申请学位级别：硕士专业：作物栽培学与耕作学指导教师：尹钧;郭天财20030601致谢本论文是在导师尹钧教授和郭天财教授的悉心指导下完成的。从论文的选题、试验设计到论文的最后完成，都倾注了恩师的大量心血。愿师严谨的治学态度、忘我的奉献精神、勤奋扎实的工作作风和淡泊名利的大家风范不仅是我永远学习的榜样，更是激励我不懈努力的动力。三年来，无论是在科研、生活还是学习上都得到导师无微不至的关怀和照顾。僚此论文完成之际，特向两位恩师献上我最诚挚的谢意!衷心感谢国家小麦工程技术研究中心的崔金梅教授、

2、朱云集研究员、王震鬻副研究员、宋家永书记、闰耀札副处长、任江萍老师以及王纯岑、李磊、刘万代、马冬云、王永华、罗毅、夏国军、高松涪等老爆在我试验过程中提供热情的指导和帮渤。尤其感访}生物工程实验室技术骨干牛告出老师，三年来，镶那忘我的工作热情和娴熟的实验技能时常激励着我懿进。潭薅省农科院小麦所许为钢研究员和农学院崔党群教授酉忙之中对论文进行了审阅，并必论文提漤宝贵的修改意霓。有幸感受两位审阅人严谨求实的工{乍作风蓐爨谦虚塌实的治学精搴枣。在此离铯{

3、、】表示衷心的感谢!衷心感谢农学院李潮海院长、玛毅暖到院长、王凌书记、罗传副书记、时永忠教授、王文亮主任、扬百黎老师、园林学院程功鹏书记、

4、范国强教授、校纪检委胡金麒老师、硬究生处介晓磊处长、李爱萍副处长、张永民老师等多年来对我学习、科班、生活等方嚣的关心、支持和帮助。衷心感谢在试验、学习和生活中给予我很多帮助的师兄(弟)姐(妹)王之杰、郭汝礼、彭羽、时学珍、张素艳、刘雷、李志岗、李会勇、李翔、谢迎新、冯伟、张学林、郭向云、姚战军、李向阳、卫利、宋丽、王祖华、方保亭、姜玉梅等。感谢同学马新业、李家美、丁俊强、懂中东、宋志红等，以及99级实习生何超在我实验的过程中给予热情的帮助。尤其感谢我的亲人们多年来对我的恩宠，他们一惯的理解、支持和爱护是我战胜一切困难的精神支柱。最后，向三年来在我学习、科研、生活等方面给予我无私帮助而

5、又未能一一述及的老师、同学、和亲人们表示诚挚的谢意!余桂荣2003年6砑予郑州河南农业大学硕士学位论文摘要本研究以小麦硫氧环蛋白反义基因(Anti—TrxS)为遗传转化的目的基因，进行了以下几个方面的研究：1、优良受体基因型的筛选与高效再生体系的优化；2、基因枪、花粉管通道及子房注射法转化目的基因；3、目的基因的检测。试验材料、方法及结果如下：i．以19个栽培小麦品种(豫麦66、豫麦18—64、豫麦34、豫麦47、豫麦49、豫麦70、豫麦18、豫麦57、周麦16、89(117)、9l(8)、偃高1号、郑麦9023、郑新991、郑新992、济麦2号、95519、OO中13、国麦1号)的

6、幼胚为试验材料，通过组织培养筛选适合基因枪法转化的优良受体基因型。研究结果表明：不同基因型对组织培养的反应有很大差异。豫麦70出愈率虽高(95．5％)，但愈伤组织分化特性却不好(分化率65．4％)；豫麦66分化率最高(85．5％)，而再生率却不高(21．7％){国麦1号分化率只有39．1％，但分化出的绿芽点一半以上都能成苗；89(117)的出愈率、分化率和再生率都很高，分别为93．8％、83．3％、32．2％，是供试品种中最理想的基因型；豫麦18—64分化率虽偏低(66．9％)，但再生率达27．3％，远高于19个品种的平均水平。综合考虑各基因型在幼胚组织培养过程中的反应，89(117

7、)和豫麦18—64是小麦基因枪法遗传转化的理想受体基因型。2．在优化高效再生体系过程中，探讨了基因型、培养基及分化前的物理处理等因素对愈伤组织的诱导、分化和植株再生的影响。结果表明：不同基因型的幼胚在离体培养时，对胚龄、培养基和培养条件的要求不一样。在诱导愈伤组织时，不同基因型间虽有差异，但各基因型对附加不同激素组合的培养基的总体反应趋于一致；愈伤组织分化时，基因型与培养基的互作效应十分显著，基本培养基中附加激余桂荣：小麦受体基因型与再生体系的优化及Anti-TrxS基因的遗传转化素的种类、浓度和配比对愈伤组织的诱导、分化具有显著的影响。愈伤组织分化前的冷冻和暗培养处理能促进其快速分

8、化出苗。本试验中适于优良基因型89(117)、豫麦18—64幼胚组织培养和植株再生的方案为：剥出直径为0．7-1．2mill的幼胚一盾片朝上接种于诱导培养基IV(MS十2，4一D2mg／L+ABA0．5mg／L)上一暗培养2～3周后，挑选胚性较好的愈伤组织转移到继代培养基①(MS+2，4-D1mg／L+ABA0．5mg／L+KTlmg／L)上一每15天继代一次(继代2～3次)一置于44C冰箱冷冻10天一挑选胚性愈伤组织转入分化培养基E或I(E为MS十ZT4