实验二-消毒与灭菌.ppt

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1、实验二消毒与灭菌（2012.09.19）一、实验目的1、区分消毒与灭菌；消毒与灭菌的方法可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法；消毒（disinfection）是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌（Steriliaztion）是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2、了解微生物实验室经常用到的各种消毒与灭菌的方法，重点掌握高压蒸汽灭菌法。实验二消毒与灭菌二、实验原理1、加热法分为干热灭菌和湿热灭菌（1）干热灭菌利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，

2、在菌体受热时，环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快；反之，含水量越小，凝固就慢。实验二消毒与灭菌二、实验原理1、加热法分为干热灭菌和湿热灭菌（1）干热灭菌有火焰灼烧和干热空气两种。火焰灼烧：适用于接种环、接种针、镊子、玻璃棒、试管口、瓶口。干热空气灭菌：160~170℃，1~2h，适用于培养皿、吸管、三角瓶等，>180℃，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。电热鼓风干燥箱实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌①高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此

3、时，由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌①高压蒸汽灭菌在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加了灭菌效力。实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要。因为冷空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力

4、下，含空气的蒸汽温度低于饱和蒸汽的温度。实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌①高压蒸汽灭菌121℃持续15~30min。适用于培养基、工作服、橡胶物品、玻璃器皿等。是微生物实验室最常用的灭菌方法，使用频率很高，所以要求每个同学都需要掌握。实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌②常压蒸汽灭菌明胶、牛乳、含糖培养基等，可用阿诺氏流动蒸汽灭菌器，也可用普通蒸笼。含芽孢细菌，采用间歇灭菌，每天加热到100℃，持续30min，连续3天。第1天，100℃，30min，杀灭其中的营养体，取出常温放置18~24h；第2天，100℃，30min，芽孢萌发的营养体被杀死；第3天，100℃，30min，彻底灭菌。

5、③④⑤实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌③煮沸消毒法100℃下煮沸10~15min，一般适用于饮用水和食具的消毒、胶管、玻璃注射器和一般外科器械的简单消毒。延长煮沸时间，并加入1%的NaHCO3或2%的石炭酸，效果更好。实验二消毒与灭菌1、加热法湿热灭菌④超高温消毒（ultrahightemperaturesterilization，简称UHTS）135~150℃，2~8s。适用于牛乳或其他液态食品（如果汁、果汁饮料、豆乳、茶及矿泉水等）。特点：既能杀死产品中的微生物，又能较好地保持食品品质与营养价值。实验二消毒与灭菌二、实验原理2、紫外线灭菌紫外线灭菌时用紫外灯进行的。波长为200~

6、300nm左右紫外线的杀菌力最强。紫外灯管实验二消毒与灭菌二、实验原理2、紫外线灭菌杀菌机制：紫外线诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制；紫外线辐射能使空气中的氧电离称[o]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2）。O3和H2O2均有杀菌作用。但是紫外线的穿透力不强，一般是只适用于无菌室、接种箱、手术室内以及病房的空气及物体表面的灭菌。紫外灯照射物体以不超过1.2m为宜。实验二消毒与灭菌二、实验原理2、紫外线灭菌杀菌无菌室（或接种箱内）喷洒3~5%石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细

7、菌。无菌室内的桌面、凳子也可用2~3%的来苏儿擦洗，然后打开紫外线照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。实验二消毒与灭菌二、实验原理3、过滤除菌（了解）通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。优点：可以不破坏溶液中各种物质的化学成分；缺点：滤量有限。实验二消毒与灭菌二、实验原理4、使用化学药品化学药品消毒灭菌法是应用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂，如重金属离子等；只是阻抑细菌代谢