实验三细菌的分布与消毒灭菌.ppt

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1、实验三细菌的分布与消毒灭菌西安医学院病原生物学与免疫学教研室目的要求熟悉几种物理消毒灭菌法的原理、用途及注意事项。熟悉几种常用化学消毒剂的抑菌作用作用原理、适用范围、浓度及注意事项。熟悉抗生素敏感试验及其实际意义。了解细菌在自然界及正常人体的分布情况。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室实验内容一、细菌的分布检查二、物理消毒灭菌法三、化学消毒剂的抑菌试验四、抗生素敏感试验：录像、分析Xi’anＭedicalUniversity微免教研室实验报告1、记录并分析紫外线杀菌试验的结果。2、记录并分析煮沸消毒试验的结果。Xi’anＭedicalUnivers

2、ity微免教研室思考讨论常用的消毒灭菌方法有那些?药敏试验的临床意义是什么?Xi’anＭedicalUniversity微免教研室一、细菌的分布检查材料普通琼脂平板、血液琼脂平板、0.5%碘伏方法空气中细菌的检查咽喉部的细菌检查手指皮肤消毒前后的细菌检查Xi’anＭedicalUniversity微免教研室原理二、物理消毒灭菌法——紫外线杀菌试验（一）紫外线能干扰细菌DNA复制，并可促使蛋白质光解，导致细菌变异或死亡。但紫外线波长短，穿透力弱，不能穿透纸张和普通玻璃。材料1、菌种：大肠杆菌18—24小时琼脂斜面培养物。2、培养基：普通琼脂平板。3、无菌黑色纸片、紫外线

3、灯等。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室二、物理消毒灭菌法——紫外线杀菌试验（二）黑纸片及平皿盖遮挡的区域内有细菌生长，其它区域无细菌生长。方法结果1、用接种环取大肠杆菌琼脂斜面培养物密涂于平板表面。2、以无菌镊子取无菌黑色纸片一张，平贴于平板表面中央。3、打开平皿盖2/3，置于紫外线灯下照射30分钟。4、取出黑纸片，盖上皿盖，37℃24小时后观察结果。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室原理二、物理消毒灭菌法——煮沸消毒试验（一）热力能破坏微生物的蛋白质与核酸，使其肽链断裂、蛋白质变性凝固、核酸解链崩解、微生物内外环境失衡等，从

4、而导致其死亡。材料1、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌18—24小时斜面培养物。2、肉汤培养管。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室方法二、物理消毒灭菌法——煮沸消毒试验（二）1、将大肠杆菌、枯草芽胞杆菌分别接种于肉汤管中。2、将已接种细菌的肉汤管置100℃煮沸5分钟。3、将煮沸后的肉汤管置37℃18—24小时，观察结果。结果1、接种大肠杆菌的肉汤管清亮，无细菌生长。2、接种枯草芽胞杆菌的肉汤管有菌膜生长。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室原理三、化学消毒剂的抑菌试验（一）化学消毒剂的杀（抑）菌机制可大致分为三种：1、使菌体蛋白质变性或凝固

5、；2、干扰细菌酶系统和影响其代谢；3、损伤细胞膜。材料1、葡萄球菌、大肠杆菌18—24小时培养物。2、普通琼脂平板。3、2％碘酒、75％乙醇、1％龙胆紫、2％红汞。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室方法四、化学消毒剂的抑菌试验（二）1、用记号笔将琼脂平板底部划成四等份。2、用接种环取葡萄球菌或大肠杆菌琼脂斜面培养物，密涂于整个琼脂平板表面。3、用无菌镊子取灭菌的小纸片，分别浸上各种消毒剂，平贴于各分区中央，盖上皿盖。4、37℃24小时后观察各种化学消毒剂的抑菌作用。5、纸片周围有大小不等的范围内无细菌生长称为抑菌圈，抑菌圈越大说明该消毒剂对该细菌的

6、抑菌能力越强。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室原理四、抗生素敏感试验——纸片法（一）药敏纸片中含有的抗生素可在琼脂中扩散，这样在药敏纸片周围就会有大小不等的范围内无细菌生长，称为抑菌圈。抑菌圈越大者说明该抗生素对该细菌的杀菌能力越强。材料1、大肠杆菌、葡萄球菌18—24小时琼脂斜面培养物。2、普通琼脂平板。3、药敏纸片(18种)。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室方法四、抗生素敏感试验——纸片法（二）1、取琼脂平板，以标记笔将其底部划分为四等份。2、用棉拭子或接种环密涂大肠杆菌或葡萄球菌于琼脂平板表面。3、用小镊子以无菌手法分

7、别将含有各种抗生素的纸片平贴于各区中央，各种抗生素纸片之间的间距应相等。4、注明标记。5、置于37℃恒温箱中，24小时后观察结果。仔细测量各种抗生素纸片抑菌范围的直径，以毫米表示。Xi’anＭedicalUniversity微免教研室