八肋游仆虫中心蛋白N端半分子Loop区首个氨基酸的作用.pdf

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1、第27卷第2期无机化学学报Vo1．27No．22011年2月CHINESEJOURNALOFINORGANICCHEMISTRY245—250八肋游仆虫中心蛋白N端半分子Loop区首个氨基酸的作用赵冰段炼刘文赵亚琴杨斌盛(山西大学分子科学研究所，太原030006)摘要：本文通过分子生物学方法将八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸，天冬氨酸Asp37和Asp73，分别突变为带相反电荷的赖氨酸使用铽敏化荧光、TNS疏水探针研究了八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loop区的首个氨基酸的作用。结果表明：当巾心蛋白

2、loopI区37位的天冬氨酸突变为赖氨酸后，loopI丧失了金属离子结合能力，进而影响了中心蛋白依赖于金属离子的构象变化：而l0oDⅡ区73位的天冬氨酸突变为赖氨酸后仍保持金属离子结合能力，依赖于金属离子的构象变化减小中心蛋白发挥大部分生物功能都依赖于金属离子，这就表明10opI区37位的天冬氨酸在中心蛋白发挥生物功能时起着重要作用，是不可缺少的。在10inno1．L-，Hepes、pH7．4、20mm01．L1KC1条件下，八肋游仆虫中心蛋白N端半分子loopU与金属离子TI】和ca2+的结合常数分别为：KⅡfT

3、b+1：(8．31~0．18)x104L．ITIO1和Knfca+1=f0．94~0．12)x10L．tool，中心蛋白N端半分子的两个金属结合部位结合能力顺序为：I>U关键词：巾心蛋白；N端半分子；Tb；Ca；TNS中图分类号：0641．1：O614．341：0614．231文献标识码：A文章编号：1001—4861(2011)02．0245—06RolesofAsp37andAsp73intheLoopofN-TerminalDomainofCiliateEuplotesOctocarinatusCentrin

4、ZHAOBingDUANLianLIUWenZHAOYa-QinYANGBin—Sheng(InstituteofMolecularScience，ShanxiUniversity,Taiyuan030006，China)Abstract：CiliateEuplotesoctocarinatuscentrinfEoCen1iSamemberoftheEF．handsuperfamilyofcalcium．bindingproteins，whichoftenassociatedwiththecentrosomesan

5、dbasalbodies．Toexploretheimpo~anceofAsp37andAsp73intheloopofN．terminalofEoCen。themutantsofN—D37KandN—D73KfDiSaspartieacid．andKiSlysine1wereobtainedbymolecularbiologicalmethods．Theexperimentsofaromaticresidue—sensitizedTbenergytransferdemonstratethat：N—D73Kcanb

6、indtwoequivalentsTb．whichiSsimilartoN．EoCenfWT．EoCenbindsfourequiv．Tb)，andN—D37KcanonlybindoneequivalentTb．Using2-p—t0luidinylnaphthalene一6-sulfonate(TNS)asahydrophobicprobe，exposureofthehydrophobicsurfaceuponmetalbindingwasfoundtobesignificantlyreducedforthem

7、etalion—saturatedN—D37Kmutant．TheresultsindicatethatAsp37playsanimportantroleinthebiologicalfunctionsofN．terminaldomainofEoCen．MeanwhiletheconditionalbindingconstantsoftheN—EoCenloopⅡwerequantitativelyfoundtobeKⅡ=(8．31-+0．18)~10L·mol～andKⅡ=(0．94±0．12)x10L·mol一

8、withTb。andCa。，respectively，andtheorderforthemetal—bindingaffinitvofthetw0sitesinN．EoCeniSI>Ⅱ．Keywords：centrin；N—terminal；Tb；Ca；TNS收稿日期：2010．09—06。收修改稿日期：2010．09—25。国家自然科学基金(No．2077