神经型尼古丁受体α3亚单位沉默对SH-SY5Y细胞β淀粉样蛋白和凋亡的影响及其机制研究.pdf

《神经型尼古丁受体α3亚单位沉默对SH-SY5Y细胞β淀粉样蛋白和凋亡的影响及其机制研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、贵阳医学院2011届硕士研究生论文神经型尼古丁受体α3亚单位沉默对SH-SY5Y细胞β淀粉样蛋白和凋亡的影响及其机制研究生物化学与分子生物学研究生：张雪玲导师：官志忠教授单可人教授摘要【目的】测定神经型尼古丁受体(Neuronalnicotinicacetylcholinereceptor,nAChR)α3亚单位mRNA沉默后的神经母细胞瘤细胞(Neuroblastomacell,SH-SY5Y)中β淀粉样蛋白（-Amyloidpeptide，Aβ）含量、β分泌酶两个亚型（Bace1和Bace2)mRNA和蛋白表达水平、细胞凋亡

2、水平、凋亡相关通路P38MAPK及凋亡相关分子（Bax、Bcl2）含量，研究α3nAChR亚单位在阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）发病中的神经保护作用。【方法】选用稳定转染α3nAChRsiRNA表达质粒的SH-SY5Y细胞、空质粒对照细胞和正常对照组细胞，用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和蛋白质印迹方法（WesternBlotting）检测α3nAChR亚单位mRNA和蛋白表达水平；用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测Aβ含量；用Real-timePCR和WesternBlo

3、tting方法检测细胞中β分泌酶两个亚型（Bace1和Bace2）mRNA和蛋白表达水平。用Aβ（10μmol/L，48小时）处理α3nAChR亚单位mRNA沉默后的SH-SY5Y细胞、空质粒对照细胞和正常对照组细胞，用AnnexinV–FITC凋亡检测试剂盒，经流式细胞仪测定细胞凋亡水平；用WesternBlotting方法测定P38MAPK通路中P38蛋白表达水平；用ELISA方法检测Bax、Bcl2含量。【结果】与空质粒对照组及正常对照组细胞相比，稳定转染α3nAChRsiRNA表达质粒的SH-SY5Y细胞中，α3nAChR

4、亚单位mRNA及蛋白表达水平降低，A含量增加，Bace1mRNA和蛋白表达水平增加，Bace2mRNA和蛋白表达水平减少。用Aβ处理后，与空质粒对照组及正常对照组细胞相比，稳定转染α3nAChRsiRNA表达质粒的SH-SY5Y细胞中，细胞凋亡率增加，磷酸化P38蛋白表达量增加，而总P38蛋白表达水平未见明显改变，Bax含量增加、Bcl2含量减少。【结论】针对α3nAChR亚单位的小分子干扰RNA有效地抑制了培养细胞中α3nAChR亚单位mRNA和蛋白水平的表达；α3nAChR亚单位mRNA沉默可以增加1贵阳医学院2011届硕士

5、研究生论文Aβ生成，其机制可能与α3nAChR亚单位mRNA沉默后增加Bace1表达水平、减少Bace2表达水平有关；α3nAChR亚单位mRNA沉默可以增加Aβ的致凋亡作用，其机制可能与α3nAChR亚单位mRNA沉默后增强凋亡相关信号通路P38MAPK和增加促凋亡相关蛋白Bax，减少抗凋亡相关蛋白Bcl2等因素有关。结果间接表明α3nAChR亚单位在AD发病过程中有一定的神经保护作用。【关键词】α3nAChR亚单位；β淀粉样蛋白；β分泌酶；凋亡；P38MAPK信号通路；凋亡相关调控蛋白2贵阳医学院2011届硕士研究生论文前言阿

6、尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease，简称AD，又称老年性痴呆)，是一种主要在老年期发生的以智力缓慢性进行性丧失为主要特征的神经退变性疾病。AD已成为继心脏病、癌症、中风后的第四位死亡原因。其主要临床表现为进行性认知功能障碍、记忆力衰退、性格和行为改变等。在欧美发达国家及我国，AD发病有增多的趋势。一般年龄在65岁左右时，AD的发病率约为2-5%,年龄[1-2]75岁左右时，发病率约为10%，年龄到90岁时，AD发病率可高达35-40%。病理学上以细胞外老年斑(Senileplaques,SPs)形成及神经细胞内神经

7、原纤维缠[3-5]结(Neurofibrillarytangles,NFTs)及神经元丢失为主要特征。老年斑的主要成分为-淀粉样蛋白(-Amyloidpeptide，A)，是一种神经毒性物质，可以引起神经元的损伤和调亡，在AD的发病中起着重要的作用。A是APP经-及-分泌酶水解生成的39-43个氨基酸多肽，其中的25-35氨基酸残基是神经毒性必需结构。β-分泌酶（BACE）是启动Aβ形成的关键限速酶。因[6]此，BACE有望成为治疗AD的作用靶点，为开发治疗AD提供了一条新思路。在AD的发病机制中胆碱能受体的改变引起了

8、越来越多的重视，胆碱能受体包括尼古丁受体和毒蕈碱样受体，尼古丁受体又分为神经型和肌肉型。nAChR与大脑学习记忆、智力发育和识别能力等脑功能有关，还具有明显的神经保护作[7]用，在阿尔茨海默病的发病中起着重要的作用。本课题组前期研究表明α3nACh