灯盏细辛活性部位对神经细胞α3尼古丁受体蛋白水平的影响论文

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1、灯盏细辛活性部位对神经细胞α3尼古丁受体蛋白水平的影响论文闫秀明，邓婕，齐晓岚，黄勇，王永林，官志忠【摘要】目的研究灯盏细辛醇提取乙酸乙酯萃取物不同活性部位对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中尼古丁乙酰胆碱能受体(Nicotinicacetylcholinereceptor,nAChR)蛋白水平的影响及其对抗β-淀粉样蛋白(Aβ)细胞毒性的作用机制,以探讨其在阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sdisease，AD)治疗中的作用。方法选用一定浓度的灯盏细辛不同部位及Aβ25～35处理SH-SY5Y细胞，

2、用比色法测定培养细胞MTT还原率.freelHerbaErigerontisontheproteinlevelofα3nicitinicreceptorsubunitinhumanneuroblastoma(SH-SY5Y)cellsandagainsttheneurotoxicityinSH-SY5Ycellsinducedbybeta-amyloidpeptide(A).MethodsTheSH-SY5YcellsHerbaErigeronitis,andexposedtoAβ25～35.MTTredu

3、ctionatricassay,andtheproteinlevelofα3nAChRsubunitHerbaErigerontisstimulatedupregulationofα3nAChRproteinintheculturedcellsandpreventedtheMTTreductionresultedfromAβ.ConclusionTheactivepartsextractedfromHerbaErigerontismaypreventneurotoxicityofAβbytheupregul

4、ationofnAChR,ightplayanimportantroleintherapeuticstrategyofAD.Keyacells;α3nicotinicreceptor;β-amyloidpeptide;Alzheimerdisease阿尔茨海默氏病(Alzheimer'sdisease，简称AD)是一种主要在老年期发生的以智力缓慢性进行性丧失为特征的神经变性疾病，是痴呆病中最常见的类型1。AD脑组织中典型的神经病理学改变是由β-淀粉样蛋白(β-myloidprotein，Aβ)沉积形成的老年

5、斑和高度磷酸化Tau蛋白聚集构成的神经原纤维缠结2。Aβ在AD的病因学或病程发展中起关键作用,Aβ的神经毒性作用是造成AD神经退行性变的主要机理之一3，4。尼古丁乙酰胆碱能受体(nicotinicacetylcholinereceptor，nAChR或称尼古丁受体)与学习和记忆等认知功能密切相关,还调节多种其他受体的功能，并具有对抗神经细胞毒素性的神经保护作用5。在较早的一些研究中就发现，AD患者大脑皮层尼古丁受体出现持续和严重的丢失，大脑皮层nAChR缺失与AD患者认知障碍有显著的相关性6。由于AD的发病

6、机制比较复杂，目前尚无有确切疗效的治疗药物。中草药在延缓衰老以及防治痴呆等相关疾病方面有着丰富的理论和实践经验，具有潜在的优势和广阔的发展前景。灯盏细辛是民间常用草药，其化学成分有灯盏乙素、黄酮、吡喃酮等十余种。灯盏细辛及其提取物可改善脑循环，增强急性缺血性脑卒中患者神经功能的恢复，对脑缺血具有明显保护作用，在治疗老年性疾病方面有着重要的作用。本研究以来源于人脑的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)作为研究对象,来研究灯盏细辛醇提取乙酸乙酯萃取物不同标本的神经保护作用机制，为进一步筛选其有效成分奠定理论基础。

7、1材料与试剂灯盏细辛活性部位由贵阳医学院提取并鉴定，灯盏细辛醇提取乙酸乙酯萃取物，经凝胶柱分离的第一区段标为D1号，将D1号样品经反相硅胶柱分离出高极性部位(标为D2号)，中极性部位(标为D3号)及低极性部位(标为D4号)。灯盏细辛乙醇提取，乙酸乙酯萃取后，再以正丁醇获得的萃取物，经凝胶柱分离的第四区段标号为D5。将D5号样品，经反相硅胶柱分离出高极性部位(标为D6)，中极性部位(D7)及低极性部位(D8)。D-MEM培养液(英国GibcoInvitrogen公司);源于人脑的SH-SY5Y细胞(德国Ger

8、manCol2lectionofMicroorganismsandCellCultures公司);羊抗α3和鼠抗β-肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体及HRP标记的抗羊及抗鼠二抗(美国SantaCruzBio-technologyInc);聚乙烯二氟(PVDF)膜、ECL-Plus发光试剂、高效显影胶片(Amersham公司);其他化学试剂均购自Sigma公司。2方法2.1细胞培养用含10%小牛血清、1%双抗(