水稻T-DNA插入突变体库的构建及侧翼序列的分离.pdf

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1、ConstructionofMutantPopulationforIndicaRiceKasalathandAnalysisoftheFlankingSequencebySHANGShangAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencemBiochemistryandMolecularBiologymCentralSouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDist

2、rictChangshaHunan410004，P．R．CHINASupervisorProfessorWANGPing，ResearchFollowCHENCaiyanApril，2011J

3、IIIIliltIIIIi中南林业科技大学．．j，Y1913学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式表明。本

4、人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。双劣作者签名：N便伽11年6月．7日中南林业科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：摘要水稻是世界上重要的粮食作物之一，由于其基因组较小，遗传背景清晰，成熟的遗传转化体系，与其它禾本科植物存在广泛的共线性等特点，成为单子叶植物研究的模式植物。研究水稻目的基

5、因组功能可以通过创造基因功能缺失突变体这个最为有效的途径进行。构建大量的水稻突变体库在研究水稻功能基因组中占有非常重要的作用。本研究是以水稻籼稻品种Kasalath为受体材料，通过构建pCAMBLA1301．pUCl9载体，利用农杆菌侵染的方法转化至水稻中，获得如下结果：1．利用限制性内切酶HindⅢ、XbaI对pCAMBIA1301和pUCl9进行双酶切，然后利用T4连接酶进行连接，成功构建pCAMBIA1301．pUCl9载体。2．以水稻籼稻品种Kasalath成熟胚诱导的愈伤组织为转化受体，利用农杆菌侵染法将pCAMBIA1301-pUCl9导入Kasalath中

6、，获得再生植株280棵。3．通过对农杆菌介导的T-DNA插入遗传转化体系的优化，将对水稻籼稻品种Kasalath得到转基因苗的时间由3个月缩短至36天。通过统计分析Kasalath转化的分化率可达到3．5％。4．对转基因植株进行PCR检测，结果表明pCAMBIA1301．pUCl9已经整合到水稻基因组中。5．利用质粒营救对转基因植物的T-DNA插入的侧翼序列进行测序，通过与GeneBank数据库进行比对，得到T-DNA插入位置。关键词：水稻Kasalath：水稻突变体库；侧翼序列；插入突变ABSTRACTRiceisoneofthemostimportantfoodcr

7、opsintheworld，becauseofrelativesmallgenomesize，sophisticatedgenetictransformationsystem，well-constructedphysicalmap，andnearcompletionofthegenomicsequencingprojectofsubspecies，andthereisawiderangeofothergrassesandothercharacteristicswerelinearandbecamethemodelmonocotplantresearch．Function

8、officegenomegenefunctionbycreatingmutantthemosteffectiveways．Constructionofalargenumberofricemutantlibraryofricefunctionalgenomicsinthestudyplaysaveryimportantrole．Inthisstudy，Kasalathriceforthereceptormaterial，BybuildingpCAMBIA1301-pUCI9vector，transformedbyAgrobacteriumi