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1、VEGF及MUC1基因在甲状腺癌中表达及意义摘要目的：探讨转移血管内皮生长因子与多态性上皮黏蛋白1(MUC1)基因在甲状腺中的表达及临床意义。方法：采用定量RT2PCR与图像扫描定量分析技术和免疫组化方法(SABC法)检测,分别检测64例甲状腺癌中MUC1基因和VEGF的表达水平。结果：MUC1基因在甲状腺癌中表达率73.43%(47/64)；MUC1在无淋巴结转移组中的检出率69.44%(25/36)；在淋巴结转移组中的检出率78.57%(22/28),P>0.05),VEGF在甲状腺癌中表达率78.12%(50/64)o结论：检测MUC1基因与VEG
2、F的表达水平可能有助于判断甲状腺癌是否转移；血管内皮生长因子与MUC1的高表达可能在甲状腺癌转移过程中具有内在联系。❷关键词甲状腺癌血管内皮生长因子多态性上皮黏蛋白2doi：10.3969/j.issn.1007-614x.2012.02.253❷资料与方法❷2009〜2010年收治甲状腺癌患者64例，男27例，女37例，平均年龄32.15岁；其中乳头状癌30例，滤泡状癌9例，髓样癌11例，未分化癌18例。MUC1质粒由赤峰学院医学院病理学教研室提供。反转录酶及Taq酶，dNTPs。DOC21000型图像扫描定量分析系统。MUC1引物的设计MUC1引物运
3、用软件进行设计。MUC1上游引物CGTCATGGA2CATTGATGGTACC,下游引物GGTACCTC2CTCTCACCTCCTCCAA,扩增片段长度228bp；对照P2action为CACTGTGTTGGCGTACAGGT与TCATCACCATTGCAATGAG,扩增长度154bpo抗体及兔抗人VEGF抗体、SABC试剂盒。❷实验具体步骤：①RNA的提取：将组织剪碎后按异硫氧酸呱一步法提取总RNA并扫描定量。②mRNA反转录：10XRTbuffer2ul,10mmol/LdNTP2u1,随机引物2ul,RNasin1p1(20U/li1),无RNas
4、e水10ul，总RNA模板2ul(0.2ug/iil)混匀后，离心8秒，采用65°C5分钟，37°C60分钟，75°C5分钟,小鼠白血病病毒反转录酶(MMLV)在37°C10分钟时加入。③PCR扩增：取反转录产物2u1作模板，依次加入dH❷2021Hl,10XPCRbuffer3u1,2.5mmol/LdNTP3ul,上下游引物与3-actin引物各取1U1,Taq酶1.5U,混匀后，离心8秒，加入30ul石蜡油,采用94°C35秒，55°C55秒，72°C1分钟，35个循环，最后在721延伸7分钟。④结果判断：每次PCR扩增皆设立阳性、阴性对照，各取产
5、物15进行10g/L琼脂糖凝胶电泳20分钟，EB染色，用DOC-IOOO型图像扫描定量分析系统对电泳分离出的片段进行扫描，获取相对A值，产物A值/-actin值比值＞1为高表达，＜1为低表达，=0为未检出表达；以比值＞0为阳性，二0为阴性。比值作为定量结果。VEGF实验方法：①免疫组化染色主要步骤：采用链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物(SABC)法，操作按试剂盒说明书进行。主要包括切片脱蜡至水，微波抗原修复，山羊血清封闭，分别依次滴加VEGF抗体过夜(工作浓度1:100),生物素化二抗及ABC复合物，DAB显色，苏木素复染后封片。用PBS代替一抗平行操作
6、染色做阴性对照，用已知乳腺癌阳性片做阳性对照。②染色结果判定标准：在组织切片中显示胞浆或胞核染为淡黄至棕黄色者为阳性细胞标志，参考Kawasaki等报道的方法计算各指标表达程度［1］。计数5个高倍视野，将平均阳性细胞数分为5类：0-阳性细胞W1%,1-阳性细胞1%〜25%,2-阳性细胞25%〜50%,3-阳性细胞50%〜75%,4-阳性细胞275%。根据染色程度将阳性信号分为3类：染色强度弱(1+)-淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色，染色强度强(3+)-呈棕黄至棕褐色染色，中等染色强度(2+)-染色强度介于弱阳性与强阳性之间，染色强度X阳性细胞百分数为
7、每例组织染色的综合记分。综合记分21判为表达阳性，<1则为阴性。❷统计学处理：运用X.2检验进行统计学处理，P<0.05为差异有统计学意义。❷结果❷VEGF与MUC1表达在甲状腺癌中的关系：VEGF与MUC1相关性分析采用spearman等级相关分析呈正相关(一0.8869)。见表lo❷讨论❷研究显示，VEGF在各型甲状腺癌中过度表达，并与肿瘤组织分化和恶性进展密切相关，进一步验证了VEGF对甲状腺癌发病的重要意义。❷进一步研究表明，MUC1基因的编码产物是十分重要的甲状腺癌标志物，用RT2PCR检测甲状腺乳头状癌及甲状腺良性病变组织中MUC1阳性表达，
8、研究结果表明，RT2PCR检测MUC1表达可作为甲状腺癌术前细针穿刺分子生物学诊
