无菌检查法试验具体操作方法.ppt

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1、无菌试验具体操作方法实际应用及注意事项CompanyLogo分类具体检测方法讨论概述试验物品准备无菌操作的要求及注意事项CompanyLogo一、概述无菌检查法系用于确定要求无菌的生物制品、原料、辅料及要求无菌的其他品种是否无菌的一种办法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查在生产检定中是很重要的一个检项，如果出现差错会有很大的隐患，近年注册申报资料中无菌检查法验证的内容确实在日渐完整和规范。2005年版《中国药典》无菌检查法增加了方法验证的内容，增加了试验的可操作性，方法更具有科学性，提高检出率。保证检验结果的准确性。CompanyLogo二

2、、试验物品准备1、培养基数量及选用：首先要确认本次试验供试品所需培养基的数量。在此基础，要多加一套相同的培养基做阴性对照。合格的培养基应保存在2-25℃并防止被污染,使用期限不得超过3周.无菌试验对培养基的质量要求高，应选用完全透明无沉淀的培养基，确认检查合格后放入试管架中，置操作间，方可使用。CompanyLogo二、试验物品准备在选取培养基时，放于眼前细致观察（包括PH值，装量是否一致、试管有无裂痕）因培养基在搬运过程中，容易造成个别试管胶栓松动，从而影响PH值的细微变化。如不细致察看，在试验中会存有很大的隐患，影响结果的判定。CompanyLogo二、试验物品准备：2、灭菌物品的确认：

3、高压根据试验要求，准备所需器材和物品。需在灭菌物品盒标注名称，并填写灭菌日期，清点无误后将其送至灭菌前间。灭菌是无菌物品生产的重要环节，根据物品的性能选择合适的灭菌方式，是确保试验质量的关键。我们通常把玻璃器皿包括吸管瓶子选择180℃2小时干热灭菌，胶栓121℃60分钟灭菌，取回灭菌物品时，一定要在有效期内使用，试验前确认指示剂是否合格及包装的完整性，干燥性，合格后方可使用。CompanyLogo二、试验物品准备：物品摆放整齐的准备间：CompanyLogo二、试验物品准备：工作人员在控制高压温度：CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项环境操作人员三大要素CompanyLogo三、

4、无菌操作要求及注意事项环境：1.无菌操作应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。2.工作台面及操作室环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的进行洁净度验证。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项3.无菌操作室每天都要用0.1%的新洁尔灭或来苏水清洁剂，清洁―次(抹布要专用).紫外线照射消毒30-50min；超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。在工作台面消毒时切勿将供试品和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放

5、置，否则会遮挡紫外线，降低消毒效果。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项人员：无菌试验操作进入万级操作间时，操作人员必须着装整齐，穿好已灭菌的三更服装。需带两层口罩，一层是白纱布，最后一层随三更服已灭菌的口罩。方可进入无菌室进行操作。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项操作即便使用设备完善的实验室。技术操作不规范,也会导致污染.CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项在操作中为最大可能的保证无菌。每一项工作都必须做到有条不紊。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项操作1.在开试验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。准备各种所需器材

6、和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全，往返拿取而增加污染机会。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项2.在无菌环境进行试验时，操作人员要确定好自己所工作的位置，操作前戴手套，酒精棉进行消毒。3.点燃煤气灯后。用火焰先把试管架上的培养基胶栓与试管口处烧灼一下，以后一切操作，如打开或封闭瓶口时，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在火焰中烧的时间过长，烧过的金属镊要待冷却后方可使用。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项4.吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭

7、膜，再用时会把有害物带入培养基中。开启、关闭供试品时，火焰灭菌时间要短，防止因温度过高灭活供试品。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害供试品。5.进行试验时，吸管抽取供试品后，要与培养基试管平行且垂直，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。CompanyLogo三、无菌操作要求及注意事项6.吸取营养液、氯化钠等及各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致