2015版无菌检查法.ppt

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1、2015版无菌检查法2014.10.07无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染环境洁净度2010版无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行2015版无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧

2、菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。培养基PH区别2010版2015版改良马丁培养基调节pH值使灭菌后为6.4± 0.2胰酪大豆胨液体培养基调节pH使灭菌后pH值为7.3±0.2营养肉汤培养基调节pH值使灭菌后为7.2± 0.2胰酪大豆胨琼脂培养基调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2营养琼脂培养基调节pH值使灭菌后为7.2±0.2沙氏葡萄糖液体培养基调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2

3、改良马丁琼脂培养基调节pH值使灭菌后为6.4±0.2沙氏葡萄糖琼脂培养基调节pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。培养基的适用性检查灵敏度检查菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至

4、硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（v/v）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％

5、（v/v）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。培养基适用性检查直观区别2010版2015版相应菌种接种所用培养基金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基白色念珠菌改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养基沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基霉菌、酵母菌培养温度23～28℃20～25℃稀释液0.9%无菌氯化钠溶液pH7.0无菌氯化钠-蛋白

6、胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液培养基的适用性检查培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支,分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。培养基接种直观区别2010版2015版硫乙醇酸盐流体培养基9支金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养基7支金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌

7、改良马丁培养基5支白色念珠菌、黑曲霉胰酪大豆胨液体培养基7支枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉方法适用性试验菌种及菌液制备除大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。方法适用性试验薄膜过滤法取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。加硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为

8、对照。置规定温度培养3～5天，各试验菌同法操作。方法适用性试验结果判断与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，