无菌检查法（2010.12）PPT

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1、无菌检查法2010.12提纲定义检查环境要求常见检验品种培养基培养基的适用性检查稀释液以及冲洗液方法验证试验供试品的无菌检查定义系指用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。<符合规定>的意义：仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。检查环境要求无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。全过程必须严格遵守无菌操作。常见检验品种注射剂(水针、粉针、油乳注射剂）眼用以及外伤用制剂（眼科手术、烧伤、严重创伤面给药制剂）无菌封装的原料药医疗器具和

2、医用材料（可吸收的止血剂、外伤用脱脂棉、纱布、可被吸收的羊肠线及一次性注射器、博士伦等）一般来说，凡直接进入人体血液循环系统、肌肉、皮下组织、创伤、溃疡等部位而发生作用的制品都要进行无菌检查。培养基硫乙醇酸盐流体培养基30～35℃红色氧化层（h＜深度的1/5）100℃水浴加热除去氧化层，时间不超过20分钟灭菌后放置3天沸水浴，10分钟后改良马丁培养基23～28℃无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶）,培养14天,应无菌生长。灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培养基12ml，9支，4种菌，30～35℃培养3天。改良马丁培养基

3、9ml，5支，2种菌（白色念珠菌、黑曲霉），23～25℃培养5天。结果判断：空白管应无菌生长,加菌管均生长良好。菌液制备（＜100cfu/ml的菌悬液）培养基的适用性检查灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查试验生孢梭菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌稀释液以及冲洗液0.1%蛋白胨水溶液稀释液如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释液聚山梨酯80-0.1%蛋白胨水溶液非水溶液制剂供试品的冲洗十四烷酸异丙酯膏剂和粘性油剂的溶剂膜滤除菌方法学验证试验何时须进行方法学验证当供试品为新的产品时当供

4、试品的组分、检验条件发生改变时验证用菌株：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌种要求：不得超过5代加菌量：＜100cfu取样量：只需确定总检验量即可检查方法的选择薄膜过滤法：适用于有抗菌作用或大容量的供试品，首选直接接种法：适用于非抗菌作用的供试品方法学验证试验薄膜过滤法取规定量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验

5、菌，作为对照。置规定温度培养3～5天。各试验菌同法操作。方法学验证试验直接接种法取硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别两两接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌；另取改良马丁培养基4管，分别两两接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉。两相同菌种管中，1管接入规定量的供试品，另1管作为对照，置规定温度培养3～5天。培养基装量要求每个容器中接种的供试品体积不得大于培养基体积的10％硫乙醇酸盐流体培养基≥15ml/管改良马丁培养基≥10ml/管方法学验证试验结果判断若含供试品的任一容器中的试验

6、菌生长微弱、缓慢或不生长，则该检验条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂、更换滤膜品种等方法，消除抑菌作用，并重新验证。与对照管比较,若含供试品各容器中的试验菌生长良好，则该检验条件下无抑菌作用或抑菌作用可忽略不计，照此检查方法进行供试品的无菌检查；供试品的无菌检查明确检验数量与检验量检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。检验量是指一次试验所用的供试品总量（g或ml）。根据供试品的情况，确定检样数量批出厂or上市抽检；（出厂产品表1；上市产品表2、表3）固体制剂or液体制剂；（液

7、体表2；固体表3）直接接种法or薄膜过滤法（薄膜过滤法应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；直接接种法应增加供试品无菌检查时每个培养基接种的样品量作阳性对照用）参考药典附录79页表1，表2，表3供试品的无菌检查阳性对照无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品金黄色葡萄球菌为对照菌抗革兰阴性菌为主的供试品大肠埃希菌为对照菌抗厌氧菌的供试品生孢梭菌为对照菌抗真菌的供试品白色念珠菌为对照菌。阴性对照取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作。供试品的无菌检查供试品的处理及接种培养基1、薄膜过滤法1.1、水溶液供试品取规定量，直接过滤

8、或者配成溶液后过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用冲洗液冲洗滤膜，所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其分成3等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。1.