农杆菌介导冷调节基因(Cbcor15a)遗传转化甘蔗体系的建立.pdf

《农杆菌介导冷调节基因(Cbcor15a)遗传转化甘蔗体系的建立.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhureISSN2095—1191；CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．8．1333农杆菌介导冷调节基因(ClocorlSa)遗传转化甘蔗体系的建立滕峥1‘2，李鸣扩，崔永祯1‘2，方位宽3，梁朝旭3，何姗珊3，梁俊3，吴凯朝3，叶燕萍1‘”，李容柏1,2(1广西亚热带生物资N49护开,l用重点实验室，南宁530005；2广西大学农学院，南宁5300053广西农业科学院甘蔗研究所，南宁530007)摘要：【目的】利用农

2、杆菌介导法，将外源冷调节基因Cbcorl5a导入甘蔗愈伤组织，建立快速、高效的甘蔗遗传转化体系，为培育具抗寒性甘蔗品种奠定基础。【方法】以新台糖22号(ROC22)为材料，通过对愈伤组织诱导、分化、生根等培养基进行优化，筛选出外源基因转化甘蔗的适合激素种类与用量、PPT用量、抗生素种类与用量；利用甘蔗转基因二元植物表达载体pCambial300一Cbcorl5a—bar，通过农杆菌介导法将目的基因Cbcorl5a导入甘蔗愈伤组织。【结果】当农杆菌菌液OD。。为0．4、侵染20min时有利于愈伤组织分化；甘蔗愈伤组织诱导和分化培养

3、阶段的最佳PPT为0．50mg／L。侵染后在共培养中添,9口500．00mg／L抗生素Cef@有效抑制农杆菌，添)日[1300．00mg／Lj{1生素Ce崤＆促进愈伤组织分化成苗，添力[1200．00mg／Lj{1生素ce玲＆促进幼苗生根。MS培养基中添加低量NAA更有利于甘蔗愈伤组织的分化；在促进细胞分裂时KT的效果明显优于6一BA。MS培养基中添加5．00mg／LNAA和70．00g／L蔗糖能有效促进分化苗生根。利用建立的遗传转化体系可获得286株转冷调节基因Cbcorl5a的甘蔗转化植株；选取83株通过PPT抗性筛选后长势

4、良好的转化植株进行阳性检测，其中有4株呈阳性。【结论】利用农杆菌介导的Cbcorl5a基因转化甘蔗的遗传转化体系能成功将Cbcorl5a基因整合到甘蔗基因组。关键词：农杆菌介导；冷调节基因；甘蔗遗传转化体系；建立中图分类号：$566．1文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)08—1333—07EstablishmentofsugarcanegenetictransformationsystembyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedcoldregulatedgene(Cbcorl5a

5、)TENGZhen91⋯，LIMin93+，CUIYong—zhenl⋯，FANGWei—kuan3，LIANGZhao—Xll3，HEShan—shan3，LIANGJun3，WUKai—cha03，YEYan—pin91，鲈，LIRong—bail，2(1GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourcesConservationandUtilization，Nanning530005，China；2AgriculturalCollege，GuangxiUniversity，Nannin

6、g530005，China；3SugarcaneResearchInstitute，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences，Nanning530007，China)Abstract：【Objective】Acold—regulatedgeneCbcorl5aisolatedfI'OInChorisporabungeanawastransten'edintosugarcaneembryogeniccallusbyAgrobacteriumtumetaciens——mediatedmethodtoe

7、stablishhigh——efficientgenetictrans—-tommtionsysteminordertoprovidebasisonbreedingsugarcanevarietieswithcoldresistance．【Method】SugarcanevarietyROC22wasusedastestedmaterialtooptimizeculturemediaforcallusinduction，budditterentiationandplantletrooting，andscreensuitablet

8、ypeanddosageofhommne，PP．I'andantibioticsdosage，whichadaptedforex—ogenousgenetransterringtosugarcane．Byusingabivalentplantexpression