DB22∕T 2987-2019 抗虫玉米Bt蛋白表达量检测技术规范.pdf

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1、ICS65.020.20B05DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2987—2019抗虫玉米Bt蛋白表达量检测技术规范TechnicalspecificationforquantitativedetectionofBtproteinsin本标准仅供内部使用不得翻印insectresistancemaize2019-05-27发布2019-06-17实施吉林省市场监督管理厅发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2987—2019本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业农

2、村厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人：龙丽坤、夏蔚、李葱葱、刘娜、闫伟、董立明、邢珍娟、谢彦博、李飞武。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2987—2019本标准仅供内部使用不得翻印抗虫玉米Bt蛋白表达量检测技术规范1范围本标准规定了抗虫玉米Bt蛋白表达量检测的总体要求、试验材料、试剂和材料、仪器设备、样品、检测程序、结果判定与表述。本标准适用于转Bt基因抗虫玉米环境安全评价中检测外源Bt蛋白含量ELISA技术的实施和运用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引

3、用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4404.1-2008粮食作物种子第1部分：禾谷类GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求GB/T19495.8转基因产品检测蛋白质检测方法本标准仅供内部使用不得翻印农业部953号公告-10.1-2007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫玉米第1部分：抗虫性农业部2031号公告-19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1

4、Bt蛋白Btprotein来自苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）由Bt基因表达的一类杀虫蛋白。3.2ELISAenzymelinkedimmunosorbentassay利用酶联抗体和底物形成有颜色反应的产物的一种定量分析方法，统称酶联免疫吸附分析。3.3检出限limitofdetection样品中被稳定检出的最低蛋白含量或浓度。3.4定量限limitofquantification样品中被定量检出的最低蛋白含量或浓度。3.5变异系数coefficientofvariation标准差与平均数的比值，用于衡量检测数据的离散程度。4总体要求1DB22/T2

5、987—20194.1检测人员应具备转基因生物安全管理和检测的相关知识，并在开展取样和检测工作前，接受相关技术和业务知识培训。4.2检测实验室应符合GB/T1949本标准仅供内部使用不得翻印5.2规定的要求。4.3检测过程应符合GB/T19495.1规定的要求。5试验材料5.1受检材料为种植的待检测的玉米材料及受体对照材料。5.2种子质量应达到GB4404.1-2008中二级以上玉米种子要求。5.3种植和管理参照农业部953号公告-10.1-2007的要求。6试剂和材料6.1除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的二级水。6.2根据待检Bt蛋白的类型

6、，选用对应的ELISA试剂盒，于保质期内验证试剂盒体系，并在有效期内使用。试剂盒的定量限（LOQ）应不大于0.1µg/L或0.1ng/g。6.3蛋白提取缓冲液可使用ELISA试剂盒中提供的，或根据需要可选择效果相当的提取缓冲液。7仪器设备本标准仅供内部使用不得翻印7.1分析天平，感量0.01g。7.2酶标仪，波长范围360nm～640nm。7.3超低温冰箱，-70℃～-80℃。7.4低温离心机，4℃、转速4000g～10000g。7.5恒温培养箱，37℃。8样品8.1取样8.1.1随机取样,每小区取样株数应不少于10株，同时采集同批待检测的玉米材料及受体对照材料，具体抽样数量和

7、方法按照农业部2031号公告-19-2013规定执行。8.1.2叶片、花丝、雌穗穗尖、茎秆、籽粒、根等玉米植株器官可作为蛋白检测的待测样品。8.1.3所采样品应单采单放，分别密封并置于恒定低温条件保存，避免污染。8.2样品制备8.2.1每个小区采集的样品分别在液氮中快速研磨成粉末，称取不少于0.5g。8.2.2按照ELISA检测试剂盒步骤，按一定的质量体积比加入蛋白提取缓冲液，制备样品蛋白溶液。9检测程序9.1一般要求9.1.1抗体、底物等的储藏条件和保质期应与生产商要求一致。2DB22/T