有害生物对转Bt抗虫植物抗性检测方法研究进展.pdf

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1、中国棉花·有害生物对转Bt抗虫植物抗性检测方法研究进展·2014，41(6)：7～10有害生物对转Bt抗虫植物抗性检测方法研究进展雒瑁瑜，张帅，王春义，吕丽敏。李春花，崔金杰(中国农业科学院棉花研究所／棉花生物学国家重点实验室，河南安阳45500O)TheResearchProgressofDetectionMethodforPestResistancetoTransgenicBtPlantLuoJunyu，ZhangShuai，WangChunyi，LyuLimin，LiChunhua，CuiJinjie摘要：作为害虫

2、抗性治理的一部分，抗性监测是必不可少的。因此，归纳和总结了多年来害虫对转Bt植物抗性的检测或监测技术，为能较早地检测和监测到害虫抗性的产生而及时提出治理对策提供依据，为转基因植物的应用提供依据，同时也为转基因植物的安全性评价研究提供借鉴。关键词：有害生物；转Bt基因植物；抗性检测；安全性评价；生态风险中图分类号：$435．622文献标志码：A文章编号：i000—632X(2O14)06—0007—04转Bt抗虫植物尤其是转Bt棉花的大量商业选田间抗性个体。具体做法是通过建立引诱靶标化种植，有效地控制了棉铃虫、红铃虫、烟芽

3、夜蛾等害虫的试验小区，种植转Bt基因植物和非转Bt基主要靶标害虫的发生危害]。转Bt抗虫基因植因植物，在一定时间后调查转Bt基因植物上害虫物的大面积种植使靶标害虫种群一直处于高选择的种群大小和活虫数，比较转Bt植物和非转Bt植压力下。其中的外源Bt蛋白和其他化学农药一物上靶标害虫的差异性，估测靶标害虫对Bt植物样，长时间的选择压有可能使靶标害虫对其产生抗的抗性程度。该方法的优点是对转基因植物的检性，从而使转Bt棉花失去效果[3]。目前，国外如美测效果较好，对大量野生的昆虫引诱作用极强，以国、澳大利亚、印度等国家已经广泛种

4、植双价抗虫室内Bt剂量区分抗性个体、自然死亡和Bt引起致棉花来代替单价抗虫棉花，以延缓靶标害虫对转基死因素联合作用来模拟检测大田昆虫抗性程度。因抗虫棉花的抗性演变]。我国从1996年种植转该方法以田间筛选抗性基因频率估计起初的抗性Bt棉花以来，大面积种植的依然是转基因单价抗虫突变因子的频率，如果抗性是由一个显性等位基因棉，使得靶标害虫的潜在抗性问题日趋严重[8]。决定，则检测较灵敏。但是害虫一般都是多寄主性棉铃虫对Bt棉的抗性监测一直是国内外学者的，从非转基因植物或杂草上迁移到转基因植物上关注和研究的焦点，其中准确检测和

5、监测靶标害虫的幼虫可能会导致监测结果的假阳性，且需要较大对转Bt棉花抗性的方法是最重要的，也是必不可的田间试验小区，种植Bt植物时间选择和地点选少的。其最主要的目的就是通过检测和监测，获取择方面要合理，否则很难发挥Bt植物直接筛选的最新的靶标害虫对转基因植物的抗性信息，以避免作用。因此，这种方法在一定程度上受限制。或减缓害虫抗性继续发展[9]。过去的十几年中，靶标害虫对转Bt植物的抗2生物测定法性检测和监测方法已经从传统的田间表型观测和2．1毒素计量反应检测法监测，发展到现代分子生物技术水平。毒素计量反应检测法一般是在室

6、内采用外源Bt纯毒素进行测定。首先是从田间采集自然种群1田间试验小区法样本(卵和幼虫均可)。若直接采集卵，拿回实验室田间试验小区法就是用转Bt基因植物来筛孵化出幼虫后可以直接进行生物测定，节约很多程序；若直接采集幼虫，需在室内饲养一代或几代来收稿日期：2014-02—12*通讯作者，cuijj@cricaas．com．cn繁殖足够的用于检测的后代。然后，通过设置一系基金项目：转基因生物新品种培育重大专项“转基因棉花环列浓度的Bt毒素，用于处理一定发育阶段的试虫，境安全评价技术”(2014ZX08011-002)]采用概率

7、值法估算该试虫的致死剂量，一般以LD。·7。或LCLD。或Ic。。和斜率值，再用已知的对毒素相比，该方法灵敏度高，达到P<10～，且能监测出敏感的试虫的敏感基线来比较致死剂量的变化；根田间种群中早期抗性的基因频率。但是此方法还据公式(抗性种群的LC。／敏感种群的LC。)计算有一定的局限性：需要有室内的抗性品系；只能检抗性倍数，从而通过诊断剂量的方法，开展田间抗测单一抗性，不适合单基因抗性。性个体的检测。但由于室内敏感基线仅是相对值，2．4F筛选法因此当用毒素剂量反应检测法检测到致死剂量值F筛选法是Andow等口首先提出的

8、筛选稀明显变化时，大田种群已经产生了抗性口，得到的有的抗性基因的方法；与F筛选法相比，该方法整信息与大田的实时情况不一致。因此，该方法应和个操作和检测过程相对复杂，但其对隐性抗性基因其他方法结合使用。检测比较方便和有效。主要分为3个步骤进行：首2．2区分计量法先从田间自然种群中采集已交配过的雌成虫，每个区分剂量法也叫