DB22∕T 2946-2018 野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范.pdf

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1、ICS65.020B05备案号：61359-2019DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2946—2018野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范Technicalspecificationsforbioassayofwildsoybeanresistancetosoybeancyst本标准仅供内部使用不得翻印nematode(Heteroderaglycines)2018-12-13发布2018-12-30实施吉林省市场监督管理厅发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2946—2018本标

2、准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业农村厅提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人：袁翠平、董英山、王玉民、赵洪锟、刘晓冬、齐广勋、王英男、李玉秋、颜秀娟。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2946—2018本标准仅供内部使用不得翻印野生大豆抗胞囊线虫鉴定技术规范1范围本标准规定了野生大豆对大豆胞囊线虫抗性的鉴定方法和抗性评价。本标准适用于野生大豆种质资源对大豆胞囊线虫的抗性鉴定与评价。2术语和定义

3、下列术语和定义适用于本文件。2.1胞囊cyst大豆胞囊线虫雌虫，每个胞囊内约含200粒～600粒卵，从胞囊中孵化出来即为二龄幼虫。2.2胞囊指数（雌虫指数）femaleIndex（FI）接种后28d~30d，供试植株根系上的胞囊数占感病对照植株根系上胞囊数的百分比。2.3本标准仅供内部使用不得翻印大豆胞囊线虫类群HGtypeHeteroderaglycinestype(HGtype)在形态上没有差异，但在寄主上具有显著致病性差异的大豆胞囊线虫群体，需采用特定的一套鉴别寄主进行鉴别。目前主要采用Niblack等学者提出的HGtype鉴别

4、寄主。3鉴定方法3.1接种物的准备3.1.1大豆胞囊线虫的繁殖3.1.1.1宜使用本地区优势HGtype或混合大豆胞囊线虫群体。3.1.1.2将含有大于30个/100g胞囊的病土装入高度16cm～25cm，盆口径15cm～25cm的塑料盆中，播种高感大豆品种，每盆3株～5株。3.1.1.3出苗后30d～35d，将大豆根系轻轻拔出，用高压水枪冲洗根系，将根系上的胞囊收集于干净的塑料桶内。3.1.2胞囊和二龄幼虫悬浮液的制备3.1.2.1将含有胞囊的悬液倒入自上而下依次为20目,40目,60目的套筛上，将胞囊收集在60目网筛上。3.1.2

5、.2将3.1.2.1收集到的胞囊用橡胶棒碾碎，使之释放出卵和少数的二龄幼虫。用洗瓶冲洗卵和二龄幼虫，将其冲入自上而下依次为200目，500目的套筛上，将卵和二龄幼虫收集在500目网筛上。3.1.2.3用洗瓶将500目网筛上的卵和幼虫转移到烧杯中，加水配制成卵和幼虫悬浮液。1DB22/T2946—20183.1.2.4摇匀并用100μL的移液器吸取一定量的卵和幼虫悬浮液置于载玻片上，通过40倍显微镜观察计数卵和幼虫，配制成2000个/mL卵和幼虫的悬浮液，备接种用。3.2接种植物的准备本标准仅供内部使用不得翻印3.2.1种子消毒将健康饱

6、满待鉴定的野生大豆、感病对照种子，用1%次氯酸钠溶液浸泡3min，期间搅动2次～3次，然后用灭菌的蒸馏水冲洗3次～4次。3.2.2种子萌发3.2.2.1消毒后的野生大豆种子在萌发前用无菌刀片在远胚芽处划破种皮。3.2.2.2将灭菌的滤纸放置在灭菌的培养皿内，然后将种子放置在湿润的滤纸上，于光照培养箱中25℃发芽3d，期间保持滤纸湿润。3.2.3幼苗移栽3.2.3.1抗胞囊线虫鉴定试验在温度保持在27℃±2℃温室内进行。3.2.3.2试验完全随机或随机区组设计，设3次重复，每个重复5株。3.2.3.3在直径27cm，高30cm的塑料桶中

7、放入5cm厚的灭菌细砂，然后将直径4cm，长25cm两端通透的PVC管插入细砂中，每个桶约插入20个PVC管，PVC管内和管间填好细砂，且高度一致，细砂距离上管口2cm。本标准仅供内部使用不得翻印3.2.3.4将萌发3d健壮的幼苗移栽于PVC管中，每管移栽1株，将移栽后的塑料桶置于27℃～28℃的自动恒温水浴箱中。3.3接种3.3.1接种时期幼苗移栽后3d～5d。3.3.2接种方法、接种量在距离供试植株1cm处用玻棒扎一个深4cm～5cm的孔，用移液器向孔中注射1mL的卵和幼虫悬浮液，用灭菌的细砂将孔填平。3.4接种后管理苗期及时浇水

8、，保持细砂湿润，温室温度保持在27℃±2℃，每个处理定期施用等量营养液。3.5调查方法3.5.1调查时期接种后28d～30d。3.5.2调查记载方法3.5.2.1胞囊收集3.5.2.1.1将PVC管连同细砂和植株从桶中轻