大豆抗胞囊线虫的分子标记研究

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1、黑龙江农业科学２０１４（７）：１５～１７ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ大豆抗胞囊线虫的分子标记研究安咏梅，王家军，李进荣，于佰双（黑龙江省农业科学院，黑龙江哈尔滨１５００８６）摘要：为了在分子水平验证大豆材料的抗病性，以对大豆胞囊线虫３号生理小种表现为抗性和感性的大豆为试材，利用已经报道的与ＳＣＮ抗病基因连锁的ＳＳＲ标记引物，对供试的大豆材料进行指纹图谱鉴定。结果表明：引物Ｓａｔｔ１３０无扩增结果，Ｓａｔｔ３０１没有多态性，Ｓａｔｔ３０９和Ｓａｔｔ０８２表现出多态性。聚类分析结果表明，所有供试材料被分成３大类，其中在合丰２５×抗线４

2、号正反交组合中，抗病亲本抗线４号与（抗线４号×合丰２５）Ｆ２、（合丰２５×抗线４号）Ｆ３抗病后代抗－２２１、抗－１３１聚为一类；感病亲本合丰２５与感病材料（合丰２５×抗线４号）Ｆ２感－１２１被聚为一类，在这个区域将感病材料分开。而其它后代材料则聚为一类，并没有将抗感材料区分开。关键词：大豆；大豆胞囊线虫；分子标记中图分类号：Ｓ４３５．６５１文献标识码：Ａ文章编号：１００２－２７６７（２０１４）０７－００１５－０３大豆胞囊线虫（ＨｅｔｅｒｏｄｅｒａｇｌｙｃｉｎｅｓＩｃｈｉｎｏ－用于大豆遗传研究中，目前，大豆上已定名的ｈｅ）是世界大豆生产上的重要病害之一，抗病品ＳＳＲ分

3、子标记就有９００多个，其中约有４５０个已种选育是大豆胞囊线虫（ＳＣＮ）多种防治措施中经定位于大豆连锁群上。因此ＳＳＲ可以成为大豆济、有效和环境友好的方法。目前，ＳＣＮ抗病育抗病育种研究中一种较好的分子标记。种中常用的温室鉴定或田间鉴定费时、费力，受环１材料与方法境因素影响较大。分子标记技术给难以用传统方１．１材料法深入进行的大豆遗传研究带来极大的方便，近以对大豆胞囊线虫３号生理小种表现为抗性年来，研究者不断探索分子标记与大豆品种对大和感性的大豆品种，即抗线４号（高抗）、哈９８－豆胞囊线虫抗性的关系，对大豆胞囊线虫抗性基４５９８（抗病品系）、合丰２５（高感）以及３个亲

4、本的因进行分子标记、定位及应用。分子标记辅助选杂交后代为供试材料（见表１）。于田间采集供试择是提高抗病育种效率的有效方法。随着经典遗材料的新鲜叶片，放在冰壶内保存。传学和分子遗传学对大豆胞囊线虫研究的深入，表１提取ＤＮＡ的编号及材料详情陆续发现了ＳＣＮ的抗性位点，并把主抗性基因已Ｔａｂｌｅ１Ｔｈｅｓｅｒｉａｌｎｕｍｂｅｒｏｆｅｘｔｒａｃｔｅｄ经定位到经典连锁群和分子连锁群上，这为寻找ＤＮＡａｎｄｍａｔｅｒｉａｌｓ［１］与之连锁的分子标记提供了方便。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，一些新的技术已ＤＮＡ编号材料名称备注ＤＮＡｃｏｄｅＮａｍｅｓＮｏｔｅ经应用到大豆抗

5、胞囊线虫研究中。ＳＳＲ（Ｓｉｍｐｌｅ１合丰２５感病亲本ＳｅｑｕｅｎｃｅＲｅｐｅａｔｓ）简单重复序列，也称微卫星２抗线４号抗病亲本ＤＮＡ（ＭｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅＤＮＡ），是一类有几个（２～３（合丰２５×抗线４号）Ｆ２感－１２１５）核苷酸为重复单位组成的串联重复序列，一般［２］４哈９８－４５９８抗病品系长达几十个到几百个核苷酸。在遗传上ＳＳＲ５（合丰２５×抗线４号）Ｆ２感－１２０呈孟德尔式遗传，为共显性标记。其多态性、稳定６（合丰２５×哈９８－４５９８）Ｆ２抗－３２１性、重复性和可信度远高于ＲＡＰＤ。ＳＳＲ广泛应７（抗线４号×合丰２５）Ｆ２抗－２２１８（合丰２５×

6、抗线４号）Ｆ３抗－１３１收稿日期：２０１４－０５－２６９（合丰２５×哈９８－４５９８）Ｆ２抗－３２２第一作者简介：安咏梅（１９６５－），女，黑龙江省哈尔滨市人，学士，高级农艺师，从事植物保护研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ａｎｙｏｎｇｍｅｉ１９６５１０（合丰２５×抗线４号）Ｆ２感－１２２＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。１１（哈９８－４５９８×合丰２５）Ｆ２抗－４２１通讯作者：于佰双（１９６３－），男，黑龙江省巴彦县人，博士，研究员，从事大豆病理研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｓｙｕ１００＠１６３．ｃｏｍ。１２（合丰２５×抗线４号）Ｆ３感－１３１１５黑龙江农业科学７期利用已经报道的与ＳＣＮ有关的ＳＳＲ

7、引物：的条带数，Ｎｘｙ代表在ｘ和ｙ中扩增出片段长度相Ｓａｔｔ３０１、Ｓａｔｔ１３０、Ｓａｔｔ３０９和Ｓａｔｔ０８２作为引物对同的条带数。遗传距离ＧＤ（ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｓｔａｎｃｅ）：遗供试材料进行扩增（见表２）。传距离＝１－Ｓｘｙ。当Ｄ＝０，Ｓｘｙ＝１时，物种ｘ和表２ＳＳＲ引物名称及序列物种ｙ的扩增片段完全相同，二者有高度同一的Ｔａｂｌｅ２ＮａｍｅａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓＤＮＡ序列；当Ｄ＝１，Ｓｘｙ＝０时，二者扩增片段完ＳＳＲ引物引物序列全不同，具有高度相异的遗传性Ｓｘｙ和ＧＤ可定量ＳＳＲＰｒｉｍｅｒｓＳｅｑｕｅｎｃｅｏｆｐｒｉｍｅｒ地反