细胞培养基本方法.doc

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1、1.操作台基本要求:BB2.1.iS合慣用右手的工作人员的垢矗细齐通凤•豪*布JS・憤用左于的工作人员可相应绘调雙工作台8B上詢品的擢放（＜21＜2.随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于・20°C或・80°C冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。3.细胞污染：（1）细菌污染AB图22楼盘相羞图H见示站壁生饮的293担嵐枝大爲杆AS污绞•低偌昱0血下可见站■炬魁闯的区域存衽一些播建发売的力小WW.＜0是各个畑色不易区分（AS）＜将出色方晅区域邊一步成大后可以凤示出各个大肠杆fiS细18・这些妇韵通常为杆状.的2pm长.宜艮约05pm＞

2、图A中駅色方晅的〜边低度均为100pm.（2）酵母污染品稳需霜匸时凤示^站的”吓污汎污树斯确环眈■乩复制时詁生（3）霉菌污染初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。（4）病毒污染一般不会对•其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，ELISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染。（5）支原体污染唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自显影4•抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出5-适合贴壁的细胞和悬浮的细胞越■培养悬浮培养潘合

3、包括原代细胞在内的大多数细8&类型•适合己谥应悬浮焙养的细臆以及其他一业无粘阳性的细胞（例如：造血堆脂）.需要定朗传代.但是易于通过倒責显建镜9,9.较易传代.但是需要每天进行细胞计数和存活眾测定.以监测生长損式：可将培养物稀释以弼3»生长.利用SB（例如：TrypLEwExpress.胰萸白3）或机械方法報厲姙腿・无爲通过弗或机械方法解离细胞.妇胞生长受襄而积限制.因而产■受限•妇胞生长受到其左培养基中浓度的限制.易于扩大培养規模・需要便用经过组铁培养处理的容器•可便用未经组织培养处理的容器逬行培养.但SSft动（即：摇晃或搅样）以便进行充分的％体交換•可连1*收获产

4、物.用于细88学研究等多种研究领域•可批■收荻产《!・用于蛋白质的大■生产及多种研究领域•&慕础培养基，减血清培养基，无血清培养基7.PH值：大多数止常哺乳动物细胞系PH为7.4；成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7）Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长8.温度：大多数人和哺乳动物细胞系在36°C至37°C最佳昆虫细胞在27°C为最佳禽类细胞在38.5°C最佳冷血动物（15°C・26°C）9.动物细胞形态划分：•成纤维细胞，贴附生长•上皮样细胞呈多角形，贴附•淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附•特殊形态：◊I型有长突触◊II型没有轴突10.

5、细胞增长模式-05104■0■■■・■246810天数图4・1・圮养细處的負里生*11式图•it半对数图凤示了宏胞至度与坊齐时何Z何的关*•1S齐的砂通寫茨厦标冷生长模式增殆・个生长生长塡慢・处于适删弄巧壤.为快at生氏做;■备的tt5＜哑席期ZM对帔vlttm醱細整呈梅誥增鬼酒只生toa弄事中的应齐*.断有生*坊齐鼻均叢艮尽（即：一科我多科皆齐累样M）我祷畑熬已占弼所有町用鼻廣时.血能即邊入存止覇（即・・平台90.駆連度大大的低甚至宪全停止•11•何时传代？•哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（）0.10.2PH单位），同时细胞浓度增大，

6、则应对细胞进行传代。•昆虫细胞PH值会上升但不超过6.412.贴壁细胞的解离方廉・■作用用逮■■見坊芥杠n«ft的农削・有址分製电韵时貞白•钛越的点■蔡：可住捋伤一些?a・談*白・談*白・♦胶康•■密MB.巳砂战多层纽构的甜息・©别址成軒缩！a廉分敵■金影战完筌.汇合片层的我皮怕胳从下耒.両不将金"・TryplE*M««SiaSttM:BftVftB*白n：卑夏便用■动詢鼻性试笊的13•贴壁细胞的传代所需材料•叢有■妲胞的憎养密25•直过组帜ia养处理的细养ta养板3养血•宪全生tea养星.SM53rc•一次性无flfi15-＜nL试U•37X4HMI.充有二■化为s«

7、的崖化空代•平氏盐落液・例如：杜尔貝科福酸北缓冲液（DPBS）.不含钙■貸和BHI•MAM.MM）：談■白■aTryplE-Express・不含1•用于洛妇*和2细感计数的试刑和设亂例如：Countess•自动細熬计兹仅.台❺童染14和血球计数8L或＜1CouherCounter*（BeckmanCouher）阳■细胞传代流程所禱与的洛液和设■均JE为无■状心•必須采用正S的无BR技术.开且在层流通风辑内工作•1.从增芥客M中吸岀用过的集砂8养墓并丢卉•2.用不含钙和後的羊命g需液冲沁8話（410cmJ«养襄面釈髡英2mL港酒）•从与貼豎