超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中的5种链格孢霉毒素.pdf

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1、第43卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2015年12月ChineseJoumalofAnalyticalChemistry1851～1858DO!：l0．11895／j．issn．0253~820．150370超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中的5种链格孢霉毒素蒋黎艳，2赵其阳2，龚蕾2，刘雁雨2'4张耀海马良焦必宁“(西南大学食品科学学院，重庆400715)(农业部柑桔产品质量安全风险评估实验室(重庆)，西南大学柑桔研究所，重庆400712)(国家柑桔工程技术研究中心，重庆400712)(农业部柑桔及苗木质量监督检验测试中心，重

2、庆400712)摘要建立了超高效液相色谱串联质谱法快速检测柑橘中腾毒素、链格孢酚、交链格孢酚单甲醚、交链孢烯和细交链格孢菌酮酸5种链格孢霉毒素的新方法。样品经改进的QuEChERS(快速、简单、廉价、高效、灵活和安全)方法一步完成萃取净化，采用乙腈一甲酸(1．5％)提取，无水MgSO和NaC1盐析，以ACQUITYUPLCBEHC柱为分离柱，用乙腈和0．1％甲酸溶液进行梯度洗脱，电喷雾正离子(ESI)多反应模式监测，超高效液相色谱．串联质谱(UPLC—MS／MS)测定。在本方法条件下，5种链格孢霉毒素在2．0～100g／L浓度范围内均呈现良好的线性关系(

3、>0．9922)，检出限在0．11—0．91g／kg之间。在5，20和100g／kg加标水平下，5种毒素的回收率在71％～112％之间，相对标准偏差为1．1％一9．9％，能满足柑橘中链格孢霉毒素检测的要求。关键词链格孢霉毒素；超高效液相色谱一串联质谱法；柑橘；QuEChERS法1引言链格孢菌是导致水果、蔬菜及冷藏食品腐败变质的主要微生物，可以产生多种次生代谢物I2J。目前，从链格孢菌中已经分离了超过30种明显有毒性的毒素，统称为链格孢霉毒素。有研究表明，这些毒素具有致突变能力、致癌、致畸、细胞毒性和基因毒性等毒性，最为重要的有链格孢酚(Ahemariol

4、，AOH)、交链格孢酚单甲醚(Altemariolmonomethylether，AME)、交链孢烯(Ahenuene，ALT)、腾毒素(Tentoxin，Ten)及细交链格孢菌酮酸(Tenuazonicacid，TeA)，而TeA是其中唯一的含氮代谢产物，被认为是毒性最大且最重要的链格孢霉毒素曲。柑橘是全球最大的水果作物之一，具有较高的经济和保健价值。有研究报道链格孢菌属能引发宽皮柑橘的褐斑病、粗皮柠檬的叶斑病和多种柑橘的黑斑病等病害，同时在果实发病中伴有链格孢霉毒素产生，给柑橘产业造成经济损失，危害食用者的健康J。目前链格孢霉毒素的研究主要集中在番茄

5、、苹果和芒果等oI“J，柑橘中5种链格孢霉毒素研究基本上是空白；而且我国现有的食品安全国家标准还未规定链格孢霉毒素的限量_l，也没有制定柑橘类水果中链格孢霉毒素的检测方法，因此，尽快建立简单、快速、高效、灵敏的柑橘类水果中链格孢霉毒素的检测方法很有必要。已报道的链格孢霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)、气相色谱．串联质谱法(GC—MS／MS)D6]、液相色谱一串联质谱法(LC．MS／MS)和超高效液相一串联质谱法(UHPLC—MS／MS)18]等，这些方法各有优缺点，近年来对多种链格孢霉毒

6、素的定量分析主要集中在后两种方法的研究和应用方面。样品的前处理技术在方法检测中起到至关重要的作用，QuEChERS(Quick，easy，cheap，effective，ruggedandsafe)技术是一项新的高效提取净化技术，具有提取净化效率高、环境污染小、操作简单快速等优点¨，因其简单性和适用性，近年来广泛应用于同时分析农产品中的农兽药、激素和抗生素等残2015-05-05收稿；2015-07-22接受本文系国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(No．2013CB127803)、国家自然科学基金项目(No．31301476)、农业部现代农业(

7、柑桔)产业技术体系建设专项(CARS-27)、2015年国家农产品质量安全风险评估重大专项(GJFP2015004)和中央高校基本科研业务费专项(XDJK2013B035)资助项目。Email：zh【yhml@163．com。bljiao@tom．corn1852分析化学第43卷留。虽然QuEChERS方法最初是针对水果和蔬菜中的农药多残留分析，最近也应用于霉菌毒素的检测。Zhang等采用QuEChERS方法对谷物中的黄曲霉毒素、T．2毒素、赭曲霉毒素和呕吐毒素等16种毒素进行前处理，UHPLC-MS／MS法检测，方法的平均回收率为70％～120％，检出

8、限为0．2～29．7kg，部分毒素回收率不高(70％左右)，而且并没有对链格孢霉