《补体的测定及应用》PPT课件.ppt

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1、补体的测定及临床应用补体是一组存在于人和脊椎动物血清中具有酶样活性、不耐热的糖蛋白补体不是单一成分，在功能效应上是以连续反应的程序进行的，故又称补体系统补体系统由补体固有成分、补体调节蛋白和补体受体组成补体的存在与抗原性异物的刺激无关，在正常人血清中，含量相对稳定，但某些疾病时，含量及其活性可发生改变补体含量与活性的检测，对机体免疫状态的评价和疾病的诊断具有重大意义补体的含量补体大多为糖蛋白，属于ß球蛋白正常血清中补体各组分含量相差较大，其中C3含量最高。补体主要在血液和肝脏中进行代谢，代谢率快，每天更

2、新一半补体的理化特性补体性质不稳定，容易受各种理化因素的影响补体标本保存在-20℃补体的活化途径1、经典途径以抗原抗体复合物结合C1q启动激活的途径，又称第一途径或传统途径，是抗体介导的体液免疫应答的主要效应方式2、MBL途径MBL结合至细菌启动的途径，激活剂是机体的炎症反应急性期时产生的MBL和C反应蛋白等3、旁路途径通过微生物表面等膜性物质，从C3开始，不依赖特异性抗体的形成，在感染早期可为机体提供有效的防御。在机体感染的过程，首先活化和发挥作用的是旁路途径和MBL途径，在特异性抗体产生时，经典途径

3、才可发挥作用经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相关的丝氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5转化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物学作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发

4、挥作用三种途径比较补体总活性测定补体总活性测定方法是以红细胞的溶解为指示，以50%溶血为判断终点，故称CH50.CH50通常是指CP-CH50（经典途径）CH50的测定方法原理应用绵羊红细胞（SRBC）和其相应的抗体（溶血素），作为能诱导补体活化经典途径的指示物和激活剂。补体能使溶血素特异性结合的绵羊红细胞溶解，当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关（特殊的S性关系）。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血

5、活性CH50测定方法1、红细胞浓度的调整绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使用前，调制成2%～5%SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化，可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波长处测定吸光值以调整红细胞浓度。2、溶血素滴定溶血素可通过SRBC免疫家兔获得，一般无需纯化试验前需先行加热56℃30min或60℃3min以灭活补体溶血素有商品销售，可按标识效价稀释使用自行制备的溶血素需进行滴定，确定使用浓度，在

6、补体活性测定中，大多使用2个单位。溶血素效价稳定，一般使用3个月后再作重新滴定3、稀释缓冲液磷酸缓冲液等PH7.2-7.4加入适量NACL,保存等渗Ca2+、Mg2+50%溶血标准管CH50的计算CH50(U/ml)=1/血清用量×稀释倍数不同的CH50测定方法，其活性参考范围不一样，一般以反应总体积2.5ml为常用，参考范围50-100U/ml.方法学评价和临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关总补体活性的参考范围为50

7、～100U/mlCH50增高见于：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等CH50降低见于：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和强直性脊柱炎、急性肾小球肾炎等单个补体成分的测定常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等测定方法：免疫溶血法（检测单个补体成分的活性）化学法（检测单个补体成分的含量）自动化免疫散射比浊法免疫溶血试验试验依据：抗原抗体结合后可激活补体的经典途径，可导致细胞溶解指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照参

8、照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分活性呈正比，仍以50％溶血为终点免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见免疫化学法免疫化学法分类1.单向免疫扩散2.火箭免疫电泳3.透射比浊法4.散射比浊法前