补体检测及应用知识讲解.ppt

《补体检测及应用知识讲解.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、补体检测及应用补体的固有成分；C1-C9、C1q、C1rC1s共11中蛋白分子调节和控制补体系统活化的成分；C1抑制物，膜协同因子蛋白等补体受体：补体C3的受体，CR1-5等补体系统组成补体系统功能参与机体的抗感染防御反应，介导细胞溶解，调理吞噬，免疫黏附以及参与炎症反应引起的机体的免疫损伤，是体内具有生物学功能的免疫效应系统和放大系统二、主要两种补体的活化途径（一）经典途径：是以IgG或IgM类抗体结合抗原后的免疫复合物为主要的激活剂，补体的11种成分全部参与的途经。分为识别、活化和膜攻破三个阶段。（二）替代途径（旁路途经）激活剂

2、是微生物的菌体多糖、内毒素、蛋白水解酶、IgG4和IgA聚合物等，参与的成分C3、C5-C9、B因子、D因子、P因子。两种补体激活途径的比较激活物抗原抗体复合物脂多糖、酵母多糖参与成分C1-C9C3、C5-C9B、D、P因子始动分子C1qC3b所需离子Ca+2、Mg+2Mg+2C3转化酶C4b2aC3bBbC5转化酶C4b2a3b（C3b）nBb或（C3b）nBbP经典途径替代途径第二节补体总活性测定一、血清补体总活性测定（CH50试验）（一）实验原理：特异性抗体与红细胞结合后可激活补体，导致红细胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分渗入，

3、引起红细胞肿胀而发生溶血，溶血程度与补体的活性有关。溶血反应程度与补体的剂量依赖呈S型曲线。（二）试验方法1.2%-5%绵羊红细胞（SRBC）的配置2.溶血素：抗绵羊红细胞抗体，是以SRBC免疫家兔所得的兔抗血清。试验前要进行溶血素的稀释和滴定。3.稀释缓冲液:PH7.2-7.4磷酸盐缓冲液Ca+2、Mg+2不同稀释度溶血素的配置最终稀释度稀释液(ml)稀释度溶血素（ml）1:10001.81:1000.21:20000.21:10000.21:30000.41:10000.21:40000.21:20000.21:50000.81

4、:10000.21:60000.21:30000.21:80000.21:40000.21:100000.21:50000.2溶血素的滴定11：10000.10.20.20.1全溶血21：20000.10.20.20.1全溶血31：30000.10.20.20.137℃全溶血41：40000.10.20.20.130分钟全溶血51：50000.10.20.20.1大部分溶血61：60000.10.20.20.1微溶血71：80000.10.20.20.1不溶血81：100000.10.20.20.1不溶血9对照__0.20.1不溶血

5、管号溶血素试管内加入的试剂量（ml）稀释度溶血素1:60补体缓冲液2%SRBC结果以最高稀释度的溶血素仍能产生完全溶血为最大有效反应管(1：4000)即为1个单位，一般试验使用2个单位(1：2000)4.50%溶血标准管配制5.血清总补体50%溶血活性测定(ml)10.101.400.50.520.151.350.50.530.201.300.50.540.251.250.50.550.301.200.50.560.351.150.50.570.401.100.50.580.451.050.50.590.501.000.50.510

6、0,001.500.50.5试管号1：20稀释血清巴比妥缓冲2u溶血素2%SRBC按以下公式求50%溶血的总补体值1CH50（U/ml）=×稀释倍数血清用量总补体活性参考范围:50-100U/ml(三)方法评价CH50测定经典途径总补体溶血活性反应的是补体9种成分综合水平缓冲液PH、离子强度、Ca+2、Mg+2浓度各个环节严加控制。第三节单个补体成分的测定主要检测的单个补体成分：C3、C4、C1q、B因子和C1脂酶抑制物方法：免疫溶血法测定补体的溶血活性免疫化学法测定补体的含量一、免疫溶血法定义：抗原与特异性抗体结合后激活补体的经典

7、途径，导致红细胞溶解。当缺乏某种补体成分时，加入指示系统，不能使补体连续激活，不发生溶血；再加入待测血清，使原来缺乏的成分得到补偿，补体成分齐全，级联反应恢复，产生溶血，溶血程度与以待测补体成分活性有关，以50%溶血为终点。（1）指示系统：兔抗血清致敏SRBC（2）实验反应系统的补体：选用或制备缺乏某单一补体成分动物或人血清的试剂（3）待测血清：待测血清标本中的补体二、免疫化学法单向免疫扩散法火箭免疫电泳透射比浊法散射比浊法第四节补体结合试验一、试验原理补体结合试验三个系统：反应系统：已知抗原或抗体与待测抗体或抗原补体系统：豚鼠血清

8、指示系统：SRBC与溶血素结合成为致敏绵羊红细胞图19-3二、试验方法（一）试剂的制备1.抗原适当纯化2.抗原和抗体的滴定:选择抗原与抗体均呈强阳性反应（100%不溶血）的最高稀释度作为抗原和抗体的效价，即一个单位由方阵滴定表可见1: