实验一血清总补体活性的测定.ppt

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1、实验一血清总补体活性的测定——CH50法实验目的要求1.掌握补体的溶细胞作用；2.了解血清总补体活性测定的方法及实际意义。MBL复习理论知识经典激活途径替代激活途径MBL途径激活物质抗原抗体复合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖甘露糖残基等起始分子C1qC3MBL、丝氨酸蛋白酶C4、C2参与补体成分C1、C4、C2、C3、C5-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需离子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3转化酶C4b2aC3bBbC4b2aC5转化酶C4b2a3bC3bnBbC4b2a3b生物学作用参与特异性免疫的效应阶段,感染后期发挥作用参

2、与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用参与非特异性免疫的效应阶段,感染早期发挥作用绵羊红细胞（sheepredbloodcell,SRBC）与其相应的抗体（溶血素）结合形成抗原-抗体复合物，经经典途径活化补体系统，使绵羊红细胞溶解。当溶血素和绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性相关。将新鲜待检血清作不同稀释后，加入反应体系，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清用量作为判定终点，可测知补体总溶血活性。（一）CH50测定法的原理溶血程度与补体含量的关系在适当、稳定的反应系统中，溶血反应与补体的剂量依赖关系呈现“S”形曲线在轻微溶血和接近完全溶血时

3、，补体量的变化对溶血程度的影响不大。但在30％～70%溶血时，补体量只要出现较小的变动，溶血程度就会发生较大的改变补体量实验材料1．仪器：水浴箱、离心机。2．材料：试管架、小试管、1毫升刻度吸管、待测血清、2%绵羊红细胞悬液、溶血素（2个单位）、pH7.4巴比妥缓冲液、50%溶血标准管、记号笔等。（二）CH50测定方法1．取洁净小试管10支，依次编号，置于试管架上。2．取1ml刻度吸管4支，按下表加入各成分，摇匀。试管号12345678pH7.4巴比妥缓冲液(ml)1.401.351.301.251.201.151.101.501:20稀释血清(ml)0.1

4、00.150.200.250.300.350.40----溶血素(2个单位)0.500.500.500.500.500.500.500.502%SRBC(ml)0.500.500.500.500.500.500.500.50置37°水浴箱中水浴30min根据肉眼观察选定所要离心的管号，2500r/min，离心5min实验结果计算:将离心后各管与50%溶血标准管比较，判定50%溶血终点管。150%溶血终点管的血清用量×血清稀释度补体活性(U/ml)=注意事项1．待检血清必须新鲜；2．实验器材必须洁净；3．加液务必准确，吸管不能混用；4．加绵羊红细胞时应摇匀；5

5、.用过的吸管等放到指定位置。（三）方法评价与临床意义方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度有关血清总补体活性的参考范围为50～100U/ml血清总补体活性增高见于：急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤等血清总补体活性降低见于：①消耗增多:免疫复合物导致的补体活化和消耗增多,如SLE.②补体的大量丢失:主要见于大面积烧伤、失血及肾脏病患者。③补体合成不足:常见于肝脏疾病患者或营养不良的病人。实验报告血清总补体活性测定（CH50法）的原理、方法、结果及意义。讨论题:补体是如何发挥溶细胞作用的？