转导血红素氧合酶-1蛋白减轻脑缺血／再灌注沙土鼠海马神经元的损伤.pdf

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1、·628·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2014May；30(5)：628～32网络出版时间：2014—4—1814：13网络出版地址：ht【p：／／www．cnki．net／kcn-aJdoi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．05．009．html转导血红素氧合酶一1蛋白减轻脑缺血／再灌注沙土鼠海马神经元的损伤万晓红，王雁，赵国良，陈华梅，邵建林(1．昆明医科大学第二附属医院重症医学科，云南昆明650101；2．昆明医科大学第一附属医院麻醉科，云南昆明650032)doi：1

2、0．3969／j．issn．1001—1978．2014．05．009活因子(trans-activatoroftranscription，TAT)能够主文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)05—0628—05动穿过细胞膜进人细胞内部。这种具有携带外源蛋中国图书分类号：R-332；R322．81；R329．．24；R743．310．22；白穿透细胞膜能力的特异多肽序列称为蛋白转导域R977．3；R977．6(proteintransductiondomain，PTD)或细胞穿膜肽摘要：目的评价血红素氧合酶一1(HO一1)蛋白转导对

3、脑缺(cellpenetratingpeptide，CPP)⋯。TAT蛋白转导域血／再灌注损伤沙土鼠海马神经元的影响。方法构建11R能够将与之共价连接的生物大分子(如核酸、多肽、(11个精氨酸残基)-HO-1蛋白，5O只沙土鼠随机分为5组蛋白质等)非特异地转导入细胞内部。TAT蛋白转(=10)：脑缺血／再灌注组(c组)，沙土鼠行脑缺血／再灌注损伤。脑缺．血／再灌注+生理盐水组(s组)、脑缺gn／再灌导域的发现为蛋白质治疗带来了新的曙光J。注+11R组(R组)、脑缺血／再灌注+5mg·kg～11R．HO．1血红素氧合酶-1(HO一1)是脑内重要的内源

4、性组(H1组)和脑缺血／再灌注+25mg·kg～11R-HO．1组保护物质之一，在细胞中发挥抗氧化、抗凋亡、调节(H2组)，各组沙土鼠腹腔分别注射5mg·kg生理盐水、5细胞增殖等功能。被激活的HO．1参与其他基因表mg·kgllR蛋白、5mg·kg～llR—HO一1蛋白或25mg·达的调控-4]，产生抑制神经元凋亡作用-6]。最kg～11R—HO一1蛋白，3h后行脑缺血／再灌注损伤。24h后近研究报道利用PTD转导HO一1蛋白，改善大取沙土鼠海马，电镜下观察海马组织线粒体的变化，检测海鼠蛛网膜下腔出血模型的脑血管痉挛。本研究拟评马神经元凋亡、Ca

5、spase-3和HO-1蛋白表达、cAMP水平。结价转导HO一1蛋白对脑缺血／再灌注沙土鼠海马神果C组、s组和R组3组间海马神经元线粒体变性率、神经元损伤的影响，探讨直接HO一1蛋白治疗的脑保经元凋亡率、Caspase-3和HO·1蛋白表达、cAMP水平变化无护作用。差异(P>0．05)；H1组海马神经元线粒体变性率降低、神经元凋亡率降低、Caspase一3蛋白表达下调、HO．1蛋白表达上1材料与方法调、cAMP水平升高(C组、s组和R组，P<0．01)；H2组海1．1实验动物6沙土鼠50只，体质量6O～80g，马神经元线粒体变性率降低、神经元凋亡

6、率降低、Caspase3由昆明医科大学实验动物中心提供。蛋白表达下调、HO-1蛋白表达上调、cAMP水平升高(H11．2主要仪器及试剂pET．21a(+)．p53．11R质组，尸<0．01)。结论HO一1蛋白转导减轻了脑缺血／再灌注粒、大肠杆菌Topo10、大肠杆菌BL21．DE3(Novagen沙土鼠海马神经元的损伤。公司，美国)，质粒纯化试剂盒(上海生工生物工程有限公司)，HO．1、Caspase-3抗体(Calbiochem公关键词：血红素氧合酶-1；缺血／再灌注损伤；海马；蛋白；蛋司，英国)。白转导域；11个精氨酸残基；凋亡1．3pET-2

7、1a(+)-llR质粒的构建_8从美国Novagen生物技术公司购买pET-21a(+)一p53．11R人类I型免疫缺陷病毒(HIV．1)的转录反式激质粒，BamHI和HindIII双酶切除p53。测序、鉴定收稿日期：2014一O1—20，修回日期：2014—02—23由上海生工生物工程有限公司完成。基金项目：云南省科技厅自然科学基金面上项目(No2008CD120)；1．4pET-21a(+)-llR-HO-1质粒的构建以云南省中青年学术和技术带头人后备人才资助项目(NoTopoTAvector质粒为摸板PCR扩增HO．1cDNA的2012HB0

8、30)；昆明医科大学第一附属医院博士科研启动编码序列，上游引物为：5一GGATCCATGGAGCGTc．基金(No2o07