运用多重PCR对淋球菌临床菌株进行检测和分型.pdf

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1、现代预防医学2014年第41卷第19期ModemPreventiveMedicine，2014，Vo1．41，NO．19·3557··实验技术及其应用·运用多重PCR对淋球菌临床菌株进行检测和分型任斌湖州中等卫生专业学校，浙江长兴313100摘要：目的建立一种可以对奈瑟淋球菌临床菌株进行快速检测和分型的PCR方法。方法根据Genbank已报道的porinI基因序列，设计合适的扩增引物和porinI基因类型检测引物，运用多重PCR技术对确诊的浙江地区的奈瑟淋球菌临床菌株进行检测和类型分析。结果在分析的43株确诊

2、的奈瑟淋球菌临床菌株中，建立的多重PCR法对ponnI基因检出率为100％，对pofinI基因分型正确率为95．35％。结论所建立的多重PCR法对于porinI基因的检出率和分型正确率高，能用于奈瑟淋球菌临床株pofinI基因的的快速检测和分型。关键词：奈瑟淋球菌；多重PCR；pofinI基因；基因型中图分类号：R1l7文献标志码：A文章编号：1003—8507(2014)19—3557—03DetectionandgenotypinganalysisofNeisseriagonorrhoeaeisolate

3、sbymultiplexPCRRENBinHuzhouSanitationSchool，Changxing,Zhejiang31310~ChinaAbstract：ObjectiveToconstructaPCRmethodofrapiddetectionandgenotypinganalysisforNeisseriagonorrhoeaeisolates．MethodsSuitableprimersofamplifyingandanalyzingthegenetypeofporinIgeneweredes

4、ignedaccordingtothereferencesequencesofpofinIgeneinGenbankanddetectthetypesofpofinIgenesofNeisseriagonorrhoeaeisolatesinZhejiangProvincebymuhiplexPCR．ResultsOfthe43Neisseriagonorrhoeaeisolates．thedetectionrateofporin1wag100％andtheaccuraterateofgenotypingana

5、lysisofporinIWag95．35％bythemultiplexPCR．ConclusionThedetectionrateandaccuraterateofgenotypinganalysisoftheporinIgenebytheconstructedmultiplexPCRarehish，whichCanbeusedforrapiddetectionandgenotypinganalysisofporinIgeneofNeisseriagonorrhoeaeisolates．Keywords：N

6、eisseriagonorrhoeae；MultiplexPCR；PorinIgene；Genetype淋病是一种在世界上广泛流行的性传播疾病，达PIA的约占10％30％E4J。因此，分析不同地区其发病率在我国性传播疾病中位居首位，近年来呈淋球菌porinI基因的优势基因型，对于研制地区适不断上升趋势。由于淋病的临床表现缺乏特异性，用性更强的淋球菌诊断试剂盒和防治疫苗具有很好其确诊主要靠实验室检查，淋球菌作为淋病的病原的指导意义。体，它的检测方法一直是重点的研究方向。颜俊青本研究根据淋球菌外膜蛋白porinI

7、的基因序等人探讨了五种淋球菌检测方法的检出率及其影响列，构建合适的扩增引物和分型引物，建立一种能因素[”，金怡等人建立测定淋球菌抗体的酶免疫测够对淋球菌临床菌株进行快速检测和分型的多重定法[23。目前，淋球菌的临床检测方法依旧以细胞PCR技术。并对已经确诊的浙江地区淋球菌临床菌培养法为主。细胞培养法虽然结果稳定可靠，但对株进行检测，分析浙江地区临床菌株的porinI的基样品的预处理要求高，培养时间长，也不适合于大因的优势基因型。以上研究为浙江地区淋病的防治规模样品的检测。因此，研制简单易行、快速高效和以后淋球

8、菌疫苗、诊断试剂盒的研制都提供了有的检测方法非常具有现实意义。此外，淋球菌主要用的参考信息和研究基础。的外膜蛋白是porinI，根据免疫性质的不同，可分1材料与方法为porinIA和porinIB两种类型[3]。PIA与PIB1．1菌株来源取自浙江地区临床诊断为淋病的病由一个单独位点的等位基因控制，通常一类菌株只例。诊断标准为传统的培养法，特征为直径0．5～表达其中一种，研究表明在各类淋球菌菌株中，