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《应用微卫星多重PCR和带型剖析辨别卑视酿酒酵母菌株》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、利用微卫星多重PCR和带型分析鉴别歧视酿酒酵母菌株EnricoVaudano_,EmiliaGarcia-Moruno摘要我们提出了一个快速的利用微卫星多重PCR分析方法鉴定酵母菌菌株。不使用苯酚的简单的DNA提取，通过快速PCR的优化程序扩增SC8132X位点,Y0R267C位点和SCPTSY7位点，带型分析产生的琼脂糖碎片，聚丙烯酰胺凝胶电泳，这些可以使我们区分30个小组的测试的商业酒株。该方法成功地在主态研究中发现两个菌株之间的优势发酵温度是在两个温度：15°C和20°Co这个方法无论是在酒和酵母生产
2、行业等D常行业和低预算的歧视酵母菌株生产是有用的。关键词：微卫星;聚合酶链式反应;酵母菌株;葡萄酒，发酵介绍用酒精发酵菌种选择酿酒现在是很普遍的。在酒的品质方面，酵母交互作用的影响变得清晰,特别是他们的贡献的味道。(LambrechtsPretorius,2000;Swiegers等，2005)。现代酿酒学家都意识到极致味道不同晶系的酒会产生不同的特点。这导致了工业生产大量的选择具冇不同的应用的不同的特征。目前,市场提供了数百株，几乎所有的物种的酵母。使酵母菌快速鉴定方法明确的并行兴趣在快速发展。在葡萄酒酿
3、造，应用程序包括核查野生株屮占主导地位的菌株的必须接种，发酵过程屮的动态应变，从酵母生产商的观点来看，在应变生产中控制产品质量，以及检测欺诈行为。生态研究捉供了最冇趣的应用Z-O在葡萄酒酿造，选定菌株接种必须预防丰富的野生酵母菌和非酵母菌株的存在。快速应变歧视的方法应该允许酵母种群的动态变化，选定应变能力优势的菌株和影响酵母生长的环境因索。在葡萄酒发酵，温度是影响酵母动态的主要因素之一(FleetandHeard,1993).生态研究表明酵母株具冇不同的认知和行为学(Epifanioetal.,1999;T
4、orijactal.,2003)・事实上，由酿酒师要求的突出特点之一是能够在一定温度下进行好发酵。通常，在一个典型的白葡萄发酵，发酵温度保持18°C以下，但是为了提高调味酯产生，减少高级醇的形成，所以达到12-15°C并不少见。在此温度下，发酵缓慢且经常发生卡住，因此，选择一个嗜寒的菌株代谢和有能力在这方面占主导地位的野生者优先。在过去几年屮，研究主要集屮在利用分子方法应变分化，如核型(recentlyreviewedbyBehetal.,2006)(CarleandOlson,1985;Blondinan
5、dVezinhet,1988)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析mDNA(Querolet,1992),以及基于PCR的方法，包括内部转录序列(ITS)的核糖体DNA测序(Montrocher,1998),插入位点多态性三角洲元素(Cameronetal.,1979;Nessetal.,1993),扩增片段长度多态性(AFLP)(DeBarrosLopesetal.,1999),,随机扩增多态性DNA(RAPD)(Baleiras-Coutoetal.,1996),,内含子剪接序列扩增(DeBarros
6、Lopesetal.,1996)和PCR线粒体基因的内含子(Lo‘pezetal.,2003).这些方法代表就解决和处理在经典生理测试时间上的壇强，但其中冇些限制，因为他们很难对常规分析，或者当他们很容易实现吋他们在应变水平不够歧视适用。此外，如RAPD三角洲的一些方法，再现性取决于DNA模板的纯度和浓度(Ferna'ndez-Espinaretal.,2001;Behetal.,2006)・这些缺点意味着昂贵和费时的DNA清理步骤，在某些情况下还需耍对一些反应來评估非重复性的发生.基于重复序列位点的长度多
7、态性简单分散在整个基因组，微卫星分析已成功用于酿酒酵母株歧视(FieldandWills,1998;GonzalezTecheraetal.,2001;Pe'rezetal.,2001;Hennequinetal.,2001;Malgoireetal.,2005).最近，与多重的微卫星多态性程度高PCR技术已经允许商业酵母菌株的大量分离(Schulleretal.,2004;Bradburyetal.,2005;Legrasetal.,2005)・这种歧视性的权力，DNA的结合其鲁棒性和适用性原始模板(Ho
8、welletal.,2004),使得PCR微卫星位点在应变歧视方面变成了一种最流行的方法。该方法的H常应用的瓶颈发生在扩增分析步：使用聚丙烯酰胺凝胶和序列测序仪器，以确定扩增产物的大小是费时又费钱。耍绕过这个限制，提出了简单的具有高强度琼脂糖电泳.(RoutmanandCheverud,1994;Ferraroetal.,1998).最近，豪威尔等(2004)建议在酵母菌株基因分型的基础上PCR扩增SC8132X
