獭兔毛色相关基因的筛选及Creb1基因的克隆和多态性分析.pdf

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1、獭兔毛色相关基因的筛选及Crebl基因的克隆和多态性分析研究生：秦立志导师：吴信生教授专业：动物遗传育种与繁殖(扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009)中文摘要家兔的毛皮尤以獭兔皮柔软、美观、轻便、保暖性好，倍受众多消费者的青睐，是一种非常重要的经济性状。哺乳动物毛色形成主要受多种多样的相关基因调控。本试验通过基因芯片技术比较青紫蓝色獭兔和白色獭兔背部皮肤组织样基因的表达差异，利用实时荧光定量PCR技术验证芯片结果，结合生物信息学分析和国内外学者的研究报道，进一步筛选与毛色形成相关差异候选基因进行后续研究，以期为獭兔毛色遗传机

2、制提供一定的基础。本试验的主要结果如下：1．利用表达谱芯片技术筛选3组全同胞青紫蓝色獭兔和白色獭兔背部皮肤组织中的差异表达基因，发现有89个共有的差异基因在三组中表达趋势一致。通过实时荧光定量PCR技术对Crebl、Wnt2、Gnaq和Gnal4这4个基因在组织样中的表达量进行检测，验证基因芯片结果。结果表明芯片的结果相对可靠。结合生物信息学分析和文献报道，找到了Crebl、TH、Wnt2、Gnaq、Dvll、Mapkl2等可能与毛色形成相关的基因。Creb磷酸化可以活化下游M1TF基因的表达，进而激活TYR基因转录，促进黑色素生成

3、。因此，我们选择Crebl基因作进一步研究。2．克隆了獭兔Crebl基因编码序列，并将其与人、牛等10个物种编码的氨基酸序列进行了同源性比较。结果发现该基因编码的氨基酸序列在不同的哺乳动物中都具有非常高的同源性，均在92％以上，与禽类、两栖类的同源性也较高，均在80％以上，说明该基因在物种进化过程中相对比较保守。通过对Crebl基因编码蛋白的生物信息学分析预测发现，该蛋白是细胞核内亲水蛋白质。利用Hopfield神经网络在线分析发现，Crebl蛋白含有327个氨基酸，其二级结构包含a螺旋(h)33．33％，无规卷曲(c)44．95％

4、，延伸链(e)21．71％。三级结构预测发现，Crebl蛋白含有一条螺旋链，没有复杂交织，II结构较为简单。本试验为了更深入了解獭兔Crebl基因在色素细胞增殖过程中的作用，利用载体构建等技术，成功构建獭兔Crebl基因的真核表达载体。3．本试验采用PCR．SSCP技术，以白色獭兔、青紫蓝色獭兔共228只个体为试验对象，针对Crebl基因的六个外显子设计特异性引物，检测獭兔该基因编码序列的多态性，结果发现，六对引物对应的扩增片段均未出现多态。关键词：獭兔；毛色；候选基因：基因芯片：Crebl基因：克隆；基因多态性IIIIdentif

5、icationofgenesrelatedtofurcolorandcloninganddiversityanalysisofCreblgeneinRexrabbitM．S．Candidate：QhaLizhiSupervisorProf．"WuXinsheng(CollegeofAnimalScienceandTechnology,YangzhouUniversity,225009)AbstractRabbitfurs，especiallyRexrabbitfurs，arefavoredbycA)nsumol'Sfortheiri

6、nherentbeauty,lightness，softness，andgoodwarmthretentionproperties．Theyaleofgreateconomicvalue．Thecolorformationprocessinmammalsismainlyregulatedandcontrolledbydiverserelativedgenes．Ourstudyachieveddifferentiallyexpressedgenes(DEGs)betweendarkchinchillaRexrabbitsandwhit

7、eRexrabbitsviagenechiptechnology．SomegeneswereseleetedfromtheDEGsforvalidationbyquantitativereal-timePCRanalysis．Andthen，Candidategeneswerefoundthatwererelatedtofurcolorformationbybothnationalandforeignscholars’researchreportsandbioinformaticsanalysis．Keygenesachieveda

8、ndprovidetheoreticalbasisforthemolccdargeneticsassodatedwithfurcolordeterminationinRexrabbits．Themainresultsareasfoll