吉非替尼对血管平滑肌细胞及内皮细胞增殖的影响及其机制的初步探讨.docx

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1、主要缩略词中英文索引Bcl-2Bcelllymphoma/lekmia・2B细胞淋巴瘤/白血病-2Caspasc-3Cysteinylaspartatc-spccificprotctcasc3Dimethylsulfoxide半胱氨酸蛋白酶-3DMSO二甲基亚飒EGFREpidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子受体EDTAEthylenediaminetetra-aceticacid乙二胺四乙酸EGFR-KTIEpidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子酪氨酸tyr

2、osinekinaseinhibitors激酶抑制剂ECendothelialcell内皮细胞FBSFetalbovinesemm胎牛血清MTT3-(4,5-dimcthylthiazol-2yl)-2,5-diphcnyltctrazoliumbromide漠化四甲基偶氮呼蓝pEGFRphosphorylationEpidermalgrowth磷酸化表皮生长因子factorreceptor受体PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphatebuffer

3、edsaline磷酸盐缓冲液SMCsmoothmusclecells平滑肌细胞SDSSodiumdodecylsulfate十二烷慕硫酸钠吉非替尼对血管平滑肌细胞及内皮细胞增殖的影响及其机制的初步探讨研究生：王苏燕导师：杨军副教授中文摘要目的：探讨吉非替尼及紫杉醇对血管平滑肌细胞(VSMC)及内皮细胞(EC)增殖的影响及其可能机制。方法：(1)以不同浓度(Oumol/L、102umol/L>10:umol/L>1umol/L>10umol/L)及不同干预时间(24h、48h、72h)的吉非替尼及紫杉醇分别作用于VSMC

4、和EC,以0umol/L作为对照组，澳化四甲基偶氮哇蓝(MTT)法测定两种药物对两种细胞壇殖的影响，并计算出增殖抑制率。(2)取lumol/L吉非替尼及紫杉醇分别干预VSMC和EC48小时，RIPA试剂盒抽提细胞总蛋白。用Bradford蛋白分析试剂盒测量所提取蛋白浓度，通过免疫印迹法(western-blotting)检测两种细胞经药物干预后Bcl-2>Caspase-3蛋白的表达。(3)取1umol/L吉非替尼干预VSMC和EC48小吋，通过western-blotting检测EGFR及磷酸化EGFR(p-EGFR

5、)、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平变化。纟吉果：(1)吉非替尼及紫杉醇对VSMC、EC的增殖均有明显的抑制作用，并且这种抑制作用呈剂量及时间的依赖性。在10—2-10tmol/L的浓度，吉非替尼对VSMC的抑制率和紫杉醇相比基本类似，但随着浓度的增加及作用时间的延长，其抑制率明显增加其至超过紫杉醇；而在102-10umol/L,相同浓度和相同作用时间，吉非替尼对EC的抑制率均明显低于紫杉醇。(2)和对照组相比，吉非替尼和紫杉醇分别干预VSMC及EC两种细胞后，细胞的Bcl-2蛋白的表达均有明显减少(p<0.

6、05),Caspase-3蛋白的表达明显增加(p〈0・05),但VSMC变化更明显；(3)EGFR在VSMC上的表达明显高于EC(p<0.01)。吉非替尼作用后,VSMC中EGFR蛋白的磷酸化明显受到抑制；在吉非替尼作用下，VSMC及EC的Akt蛋口的磷酸化受到一定程度的抑制，而VSMC更明显。结论：吉非替尼与紫杉醇相比，可同样有效抑制VSMC的增殖并促进细胞凋亡，但对EC增殖的抑制作用却比紫杉醇明显降低，其机制与VSMC及EC的EGFR表达不同有关，而促使细胞凋亡的机制可能与吉非替尼抑制P-EGFR/Akt信号通路有

7、关。关键i司：吉非替尼；紫杉醇；平滑肌细胞；内皮细胞；凋亡；EGFRoTheeffectofgefitinibonvascularsmoothmusclecellsandendothelialcellsproliferationanditspreliminarystudyofmechanismAbstractObjective：ToInvestigatetheinfluenceofgefitinibandpaclitaxelonvascularsmoothmusclecells(VSMC)andendothelialc

8、ell(EC)proliferation,andthepossiblemechanismbetweenthem.Method：CulturedVSMCandECweretreatedwithdifferentdosesanddurationsofgefitinibandpaclitaxel.MTTmethodwasusedtome