骨髓单个核细胞在脑缺血大鼠脑内受损区域的定向分化.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterBoneMarrowMononuclearCellsOrientatesDifferentiationintheBrain’SImpairedRegionafterCerebralIschemiaRatsByMingChenSupervisor：Prof．JianpingWangNeurologyThefifthAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2013原创性声明本人郑重声明：所提交学位论文，是本人在导师

2、的指导下独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文懈宁丐少吼％船厂月，夕日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本

3、学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文懈≯札吼加·；年厂月，彦日摘要骨髓单个核细胞在脑缺血大鼠脑内受损区域的定向分化研究生陈明导师王建平教授郑州大学第五附属医院神经内科河南郑州450052摘要背景与目的缺血性脑卒中(cerebralischemicstroke)，是指因各种原因引发的脑部血流的供应障碍，使局部脑组织缺血、缺氧性坏死，进而致使神经元及胶质细胞死亡，引发相应血供区域的运动、感觉障碍或认知功能障碍。目前通过移植外源性的具有自我更新和定向分化能力的全能

4、／多潜能干细胞是治疗缺血性脑卒中最具有潜能的治疗战略。骨髓来源的单个核细胞(Bonemarrowmononuclearcells，BMMNCs)是由间充质干细胞、造血干／祖细胞及不同时分化时期的血细胞、内皮祖细胞等组成的一种含有多种成分的混合细胞。相较于胚胎干细胞及神经干细胞等其他类型干细胞，BMMNCs具有取材方便、提取仅需1．5．3h、无需培养、可自体移植、无道德伦理学争议等诸多优点，因此，BMMNCs被视为最佳的多潜能候选种子干细胞。最新研究证实BMMNCs在体外特定的微环境的诱导下能够向心肌细胞、肝细胞、脂肪细胞、雪旺细胞等方向定向分化。诸多研究结果表明通过

5、移植BMMNCs治疗缺血性脑卒中安全、有效。有研究报道产生上述结果的可能性机制是BMMNCs移植后可释放多种神经保护因子，但其关键性机制仍不清楚，其在脑梗死后这种特定的微环境中具有怎样的分化命运尚未见报道。本研究将进一步评估移植后脑梗死大鼠的行为学、脑梗死体积及学习记忆能力，并检测BMMNCs在脑梗死后侧脑室室管膜下区(sub．ventricularzone，svz)、海马齿状回(dentategyms，DG)及缺血半暗带(ischemic／penumbra，I／P)的受损区域定向分化情况，从而进一步探讨BMMNCs移植后疗效及其产生的可能性机制。摘要方法采用线栓法

6、制备大脑中动脉梗死大鼠模型(pMCAO)，筛选成功模型后将其随机分为溶剂组(vehicle组)和BMMNCs移植组(BMMNCs组)。提取细胞前供体经连续腹腔注射Brdu进行BMMNCs标记。密度梯度法分离大鼠BMMNCs，BMMNCs组于脑梗死24h后经尾静脉注入lmlBrdu标记含lxl07个BMMNCs细胞悬液，vehicle组注射同等体积PBS溶液。于移植后1、3、7、14、28和35天采用神经功能损害严重程度评分(mNss)观察神经行为学功能，于移植后7天采用TTC染色法评估脑梗死体积的改变，于移植后30．35天采用水迷宫测试治疗后大鼠的学习和记忆能力的改

7、变，于移植后35天采用尼氏染色法评估海马区神经元密度的变化和免疫荧光双标法观察BMMNCs在脑梗死后SVZ、DG、及I／P受损区域能否定向分化为神经元和神经胶质细胞。结果1．mNSS评分和水迷宫实验BMMNCs移植组的mNSS评分均明显低于vehicle组，差异具有统计学意义(P<0．05)，BMMNCs移植组和vehicle组组间比较显示移植后1天和3天两组间无统计学意义差异(P>O．05)，移植后7天、14天、28天和35天两组间差异均有统计学意义(尸