骨髓基质细胞在大鼠纹状体出血模型脑内的存活及迁移

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1、骨髓基质细胞在大鼠纹状体出血模型脑内的存活及迁移【摘要】目的观察骨髓基质细胞(MSCs)在大鼠纹状体出血模型脑内的存活及迁移特点，探讨其移植于出血脑内的可能性及适宜条件。方法用密度梯度离心法分离培养成年SD大鼠的MSCs，流式细胞仪检测细胞表面抗原CD11b、CD45和CD90以确定其纯度，细胞大量扩增后用逆转录病毒载体转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记基因。胶原酶加肝素纹状体注射法制备大鼠脑出血模型，行为学检测成功后，将细胞悬液5μL立体定位植入脑出血模型大鼠出血灶周边。不同时间分批灌杀大鼠，取脑作冰冻

2、切片，免疫组织化学法检测移植细胞的EGFP表达。结果流式细胞仪检测发现CD90+/CD45-/CD11b-细胞达到75%。细胞在体外能够稳定地表达EGFP。MSCs在脑出血灶周边至少可存活4周，这些细胞形态多样，主要分布于出血灶周边，并向周围脑实质迁移，大多数细胞定居于血管周围。结论分离培养的MSCs纯度高，增殖能力强，可高效表达EGFP，移植到脑出血灶周边可存活并向周围迁移。【关键词】脑出血纹状体骨髓基质细胞移植存活大鼠　　Abstract：ObjectiveToexplorethesurvivingand

3、migrationofBoneMarroalCells(MSCs)inbrainofthestriatalhemorrhagemodelofrat,andtoinvestigatethepossibilityandappropriateconditionoftransplantingMSCsintobrainofthestriatalhemorrhagemodel.MethodsMSCsadultSpragueDaethod.CellsurfaceantigenCD11b,CD45andCD90easure

4、dinordertoestimatethepurityofMSCs.Afterbeingexpanded,transductionofMSCsed.Thestriatalhemorrhageanimalmodel.Afterpraxiologytestsucceeded,5μlMSCssuspensionorrhagemodel.Thenratse,andbrainsectionsinedthesurvivingandmigrationofMSCsintheareaaroundhemorrhagefocusb

5、yexaminingEGFPexpressionoftransplantedcellsbyimmunohistochemicalmethods.ResultsCellsurfaceantigentestshoorrhagefocusofthestriatalhemorrhagemodel.Inthehemorrhagefocus,afeultiplemorphologicalappearance,migratedintotheareaaroundthehemorrhagefocus,andmostofthem

6、residedaroundthevessels.ConclusionTheresultssuggestedthattheculturedMSCshadahighpurity,strongabilitytoproliferate,andgreatcapabilityoflongtermexpressionofEGFP.Afterbeingtransplantedintoratbrain,MSCscouldsurviveandmigrateinareaaroundthehemorrhagefocus.Furth

7、erstudyisnecessarytoconfirmagecausedbyintracerebralhemorrhage.　　Keyorrhage；striatum；bonemarroalcells；transplantation；surviving；rat　　随着干细胞研究的深入，替代疗法已成为脑损伤修复的新希望。骨髓基质细胞(bonemarroalcells，MSCs)是源于骨髓的一种多能干细胞［1］，在特定条件下，可跨胚层分化为神经胶质细胞和神经元［2］。由于其具有丰富、采集方便、扩增迅速、可行自体移

8、植等诸多优点，已被广泛用于帕金森病(PD)、脑创伤、脑梗死等多种疾病的细胞和基因治疗研究［3-5］，而在脑出血方面至今尚未见报道。本研究将标记的大鼠MSCs立体定位植入大鼠纹状体出血模型脑内，运用免疫组织化学法观察其在脑内的存活及迁移特点，探讨MSCs移植于出血脑内的可能性及适宜条件。　　1材料与方法　　1.1材料动物：成年Sprague-Daa公司制品；CD45＼CD11b＼CD90荧光抗体为BD