PTEN在冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中的表达及褪黑素对其作用的研究.pdf

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1、Y950142分类号：R96福建医科大学学校代码：10392学号；200300l硕士研究生毕业论文PTEN在冈田酸诱导SH-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中的表达及褪黑素对其作用的研究ExpressionofPTENinSH-SYSYCellsinwhichtau～ProteinWasInducedHyperphosphorylationbyOkadaicAcidandEffectofMelatoninonit所在院(系)：药学院研究生：许文芳学科(专业)：神经生物学导师：俞昌喜教授研究起止日期：2004年9月--2006年3月二

2、oo六年六月ADMIJABOAPHFNFTMAPDMS0～ⅡTPBSAcrBisTrisSDSTEMEDGSK3BP13KAktNBTBCIPHRPAPDAB英文缩写字表AIzheimer’SDiseasemelatoninbetaamyloidproteinOkadaicacidpairedhelicalfilamentneuronbrillarytanglemicrotubuleassociatedproteinsdimethylsulfoxide3一[4，5一Dimethylthiazol一2-y1]-2，5一diphenyl

3、tetrazoliumbromidePhosphatebufferedsaline左-crylamideBis—Acrylamide"Iris—HydroxymethylAminomethaneSodiumDodecylSulfateN，N，N’，N'-TetramethylethylenediamineGlycogensynthasekinase3BPhosphatidylinositol3konaseProteinkinaseBnitrobenzenethiocyanate5．Bromo一4．Chloro．3’．Indolyph

4、osphatep-toluidineSalthorseradishperoxidasealkalinephosphatasediaminobenzidine阿尔茨海默病褪黑素B淀粉样蛋白冈田酸成对螺旋丝神经原纤维缠结微管相关蛋白二甲皿砜四甲基偶氮唑盐磷酸缓冲液丙烯酰胺N．N’．甲叉双丙烯酰胺三羟甲基氨基甲烷十二烷基磺酸钠四甲基乙二胺糖原合成激酶3B磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B硝基苯硫氰酸酯5。溴．4．氯．3．吲哚．磷酸辣根过氧化物酶碱性磷酸酶二氨基联苯胺中文摘要PTEN在冈田酸诱导SI-I-SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化中的表达及褪

5、黑素对其作用的研究许文芳(硕士研究生)导师：俞昌喜教授目的：以tau蛋白过度磷酸化为反映AD(Alzheimer’SDisease)发生发展的关键指标，初步探明实验性AD诱导产生过程中的PTEN表达状况及其与tau蛋白过度磷酸化的关系，以深化理解AD的发病机制；探讨褪黑素(melatonin，MLT)抗AD样细胞效应及其与tau蛋白过度磷酸化及PTEN表达的关系，为MLT及其同系物的临床应用提供理论基础。方法：①采用冈田酸(Okadaieacid,OA)诱导SH—SY5Y细胞，以tau蛋白过度磷酸化和细胞活性的变化为观察指标，建立用

6、于AD研究的细胞模型。②MTT法检测细胞活性。③Westernblot法测定sH—SY5Y细胞Ser3”位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平。④免疫细胞化学法观测SH．SY5Y细胞内tatl蛋白样免疫阳性反应物。结果：①OA孵育SH．SY5Y细胞可显著降低细胞活性，作用随着OA浓度的增高和作用时间的延长而增强；40nmol／LOA作用SH—SY5Y细胞不同时间，可见细胞中se?96位点磷酸化tau蛋白水平于作用后3h开始升高，6h和12h进～步升高，24h达高峰，随后开始下降，48h的水平仍高于基础值，提示OA可诱导SH．SY

7、5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化。②40nmol／LOA孵育SH．SY5Y细胞，同时观测细胞中Set396位点磷酸化tau蛋白水平和PTEN蛋白水平随OA作用时间的变化，可见se?96位点磷酸化tau蛋白水平变化同上，而PTEN蛋白水平于OA作用后6h、12h高于基础水平，24h、48h则低于基础值，提示在OA诱导SH．SY5Y细胞tau蛋白过度磷酸化过程中，PTEN表达存在变化。③10pmol／L和100gmol／LMLT预处理细胞2h，随后加40nmol／LOA孵育细胞24h，可见MLT预处理组细胞活性显著高于OA处理组，

8、Se?96位点磷酸化tau蛋白水平明显低于OA处理组，提示MLT可对抗OA诱导sH—SY5Y细胞活性下降和tau蛋白过度磷酸化。④109mol／LMLT预处理细胞2h，随后加40nmol／LOA孵育细胞12h，M【T预处理组细胞PTE