褪黑素对Aβ2535诱导AD大鼠认知障碍和海马tau蛋白磷酸化保护作用研究

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1、山东大学硕士学位论文褪黑素对Aβ25-35诱导的AD大鼠认知障碍和海马tau蛋白磷酸化的保护作用研究姓名：王敏申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：李晓红20070515原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：圣鱼坠日期：鲨玉墨!!关于学位论文使用授权的声明本人同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的印刷件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权

2、山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：主塾导师签名：逊日期；≥立：￡!f山东大学硕士学位论文褪黑素对Apzs-as诱导的AD大鼠认知障碍和海马tau蛋白磷酸化的保护作用研究研究生：王敏导师：李魔红教授中文摘要目的：研究A陆。5海马内注射可导致大鼠的认知功能障碍、破坏海马组织形态及诱导海马tau蛋白过度磷酸化，在此动物模型基础上进一步研究褪黑素对AD大鼠的认知功能障碍、海马组织形态改变及海马tau蛋白过度磷酸化的保护作用。初步阐明褪黑素抗AD模型大鼠的作用机制，同时

3、有助于加深理解AD的发病机制。方法：选用健康雄性Wistar大鼠24只，体重250g-300g，将其随机分为三组：对照组，AD组，MT治疗组。用无菌生理盐水将A陆m(Sigma产品)溶解稀释至5pg舢I，37"C孵育72h，使其变为聚集态的A胁45。通过立体定向仪，分别向AD组和MT治疗组大鼠的左侧海马注入凝聚态的Apzs-3s2山，向对照组大鼠的左侧海马注入生理盐水2m。MT治疗组大鼠给予NIT腹腔注射，其余两组大鼠给予生理盐水腹腔注射。术后第13d，各组进行Morris水迷宫训练5d，记录成绩。行为学测试结束后，将大鼠麻醉，生理盐水及犏多聚甲醛进行心内灌注，取脑．制作病理标本，在光镜下观

4、察大鼠海马组织形态学变化，免疫组化法检测过度磷酸化tau蛋fl(Ser202)的表达。结果；1．MT对大鼠认知能力的影响进行Morris水迷宫训练过程中，各组大鼠逃避潜伏期逐渐缩短，记录第5d的成绩，统计学处理后发现，AD组较对照组逃避潜伏期明显延长(41．3士3．4s)，撤离平台后在原平台象限内游泳的时间占整个游泳时间的百分比显著降低山东大学砸士学位论支(21．20：1=1．28％)，穿过原平台位置的次数明显减少(3，6士1．517)，且差异具有显著性(p(0．001)；MT治疗组与AD组相比较，逃避潜伏期缩短(15．7士1．6s)，撤除平台后MT治疗组大鼠在原平台象限内游泳时间占总游泳时

5、间百分比升高(38．80't2．59％)，穿过平台位置的次数增多(7．2：1：1．789)，且差异具有显著性Q<0．001)；MT治疗组与对照组比较，差异无显著性。2．MT治疗后对AD大鼠海马组织病理变化的影响HE染色结果显示：对照组海马神经细胞呈圆形或椭圆形．排列整齐紧密，染色均一，细胞核圆且大，核仁清晰．AD组海马神经细胞层次明显减少，细胞排列稀疏，细胞核深染、固缩为三角形或多角形，周围可见增生的大量胶质细胞。MT治疗组海马神经细胞排列较整齐，细胞呈圆形或椭圆形，核仁清晰，细胞脱失少见，反应性胶质细胞增生明显减轻。改良Bielschowsky镀银染色结果显示：对照组海马结构和神经元形态正

6、常，胞体未着色，轴突呈棕褐色，神经元纤维排列有序，稀疏。AD组神经元纤维走形不规则，有密集、融合、断裂现象，银染加深，但未查见明显的神经元纤维缠结。MT治疗组神经元纤维排列较AD组明显整齐、有序，密集程度明显缓解，但不及对照组。3．免疫组织化学染色法检测大鼠海马区tau蛋白Set202位点过度磷酸化与对照组相比较，AD组大鼠海马CAl区神经细胞胞浆呈深棕色，阳性细胞明显增多，差异具有显著性(P

7、有效，MT治疗组大鼠海马区过度磷酸化tau蛋白明显减少；对照组与MT治疗组相比较没有显著性差异．结论及意义：lA助"s海马内注射可诱导大鼠的学习记忆功能障碍，MT对AD大鼠空间记忆损伤具有保护作用；2AB2Ⅲ海马内注射可导致大鼠海马神经元脱失及神经纤维紊乱、断裂，MT对AD大鼠海马病理改变具有一定的保护作用：神经元脱失减少，神经纤维走形规则。2山东大学硕士学位论文3AB25d5海马内注射可诱导tau蛋白过度磷